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TNF-α促进大鼠胰岛β细胞系凋亡
目的 观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对胰岛细胞凋亡及TXNIP表达的影响.方法 体外培养大鼠胰岛细胞系INS-1细胞,用CCK-8检测TNF-α(0、1、5、10和20 mg/L)的细胞存活率;确定TNF-α作用的佳浓度和时间后,给予TNF-α(5 mg/L,24 h)处理INS-1细胞;用CCK-8与流式细胞术检测胰岛细胞的存活和凋亡;real-time PCR检测TXNIP和ChREBP mRNA表达;Western blot法检测TXNIP、ChREBP和FOXO1蛋白的表达.结果TNF-α呈浓度依赖性降低INS-1细胞存活率(P<0.05),并诱导细胞凋亡;与对照组相比,TXNIP和ChREBP mRNA及蛋白表达水平均上调(P<0.05);FOXO1蛋白表达水平下调(P<0.05).结论TNF-α诱导INS-1胰岛细胞凋亡,加重细胞损伤.
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小鼠肝脏ChREBP的表达与高胰岛素血症的实验研究
探讨血胰岛素水平对机体碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)及乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)表达的影响.分别应用高血胰岛素合并高血糖的KKAy小鼠模型和高血胰岛素DIO小鼠模型,采用Western blotting法观察动物肝脏ChREBP、FAS和ACC蛋白水平.结果显示,KKAy小鼠血胰岛素与血糖水平(r=0.902,P＜0.000)、血胰岛素与血TG水平(r=0.732,P＜0.000)均呈明显正相关;且随着血胰岛素水平的升高,其肝脏ChREBP、FAS和ACC的蛋白表达也呈渐进性升高.DIO小鼠血胰岛素与血糖水平无明显相关性;血胰岛素与血TG水平呈明显正相关(r=0.722,P＜0.001);随着胰岛素水平的升高,肝脏ChREBP及其调控的FAS、ACC的蛋白表达呈渐进性升高.结果提示,在代谢综合征小鼠模型中,血胰岛素水平对肝脏ChREBP的表达具有正向调控作用,机体长期的高血胰岛素状态可能会引起ChREBP及其靶基因蛋白的过表达,从而导致机体的糖脂代谢紊乱.
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碳水化合物反应元件结合蛋白研究进展
Yamashita等[1]于2001年发现了一种与碳水化合物反应元件(carbohydrate response element, ChRE) 结合的蛋白质,命名为碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate response element binding protein, ChREBP).ChREBP广泛分布于哺乳动物的各种组织中,在肝脏、褐色及白色脂肪组织、小肠、肾和肌肉等组织中有较高的表达[2].ChREBP是葡萄糖信号途径中的转录因子,对于调节哺乳动物体内糖代谢、脂肪代谢以及组织脂肪沉积等具有十分重要的作用[3].
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肝细胞癌中ChREBP基因CpG岛甲基化与mRNA表达的相关性
目的 检测肝细胞癌中ChREBP基因CpG岛甲基化水平及mRNA表达水平,并探讨两者的相关性.方法 收集肝细胞癌及癌旁冰冻组织90例,采用亚硫酸氢钠处理结合克隆测序检测ChREBP基因CpG岛内29个CpG位点的甲基化水平;采用荧光定量PCR检测其中31对新鲜冰冻组织中ChREBP基因mRNA表达水平,分析甲基化水平与mRNA表达之间的关系.结果 ChREBP基因的5、6、7、14号CpG位点甲基化水平在肝细胞癌中显著低于其配对的癌旁组织(P＜0.05).其余CpG位点及整体甲基化在肝细胞癌与癌旁组织中差异无统计学意义(均P＞0.05).15、18、20、23、26、29号CpG位点在≥50岁年龄组的甲基化水平均高于＜50岁年龄组(均P＜0.05).肝细胞癌中ChREBP基因mRNA表达水平低于癌旁组织(P=0.003),但与甲基化无显著相关性(P＞0.05).结论 肝细胞癌中ChREBP基因mRNA表达水平低于癌旁组织,但这一改变可能不是通过影响DNA的甲基化水平实现的.
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肝脏ChREBP在有氧运动预防C57BL/6小鼠非酒精性脂肪肝形成中的作用
目的 探讨肝脏碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)基因及其下游靶基因在12周有氧运动预防C57BL/6小鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)中的作用.方法 8周龄C57BL/6小鼠随机分为正常饮食组(ND),正常饮食运动组(ND-Ex),高脂饮食组(HFD),高脂饮食运动组(HFD-Ex).高脂喂养进行非酒精性脂肪肝造模.有氧运动采用无负重游泳.检测各组小鼠肝脏、血甘油三脂及总胆固醇含量,空腹血糖,口服糖耐量,肝中脂质沉积情况,肝脏ChREBP基因及其下游靶基因表达变化,肝脏Akt磷酸化水平.结果 与ND组相比,HFD组小鼠体重及血脂增加,肝甘油三酯增加并出现明显脂质沉积,血糖调节能力下降,ChREBP基因及其下游靶基因表达增加,Akt磷酸化水平下降.与HFD组相比,HFD-Ex组小鼠血脂下降,肝甘油三酯含量减少、脂质沉积减轻,未出现空腹血糖及糖耐量异常,ChREBP基因及其下游靶基因表达下降,Akt磷酸化水平增加.结论 有氧运动对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝有预防作用,这可能与有氧运动抑制ChREBP基因表达有关.
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芒果苷改善高果糖所致HepG2细胞内甘油三酯沉积机制研究
目的 研究芒果苷改善高果糖诱导的HepG2细胞内甘油三酯沉积的可能机制.方法 低糖(1 g/L葡萄糖)条件下培养的HepG2细胞分为对照组(1 g/L葡萄糖,无果糖)、果糖组(1 g/L葡萄糖+ 30 mmol/L果糖)、果糖+芒果苷组(同时加入葡萄糖浓度1 g/L+ 30 mmol/L果糖+不同剂量的芒果苷,使其药物终浓度分别为6.25、12.5、25、50 μmol/L),药物干预24 h之后,油红O染色观察细胞内脂滴的沉积情况,酶法测定细胞内甘油三酯(TG)的含量,Real-time PCR检测碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、肝型丙酮酸激酶(LPK)、二酯酰甘油酰基转移酶2(DGAT-2) mRNA表达的变化.结果 油红O染色结果显示,与对照组相比,果糖组的HepG2细胞脂滴显著增多,细胞内TG含量也明显升高(P＜0.05).与果糖组对比,低剂量的芒果苷对果糖导致的细胞内脂滴的沉积无影响,较高剂量的芒果苷(25 μmol/L和50 μmol/L)使细胞内的脂滴数量明显减少,细胞内TG含量显著降低(P＜0.05),以50 μmol/L的芒果苷干预效果好.Real-time PCR结果显示,与对照组相比,果糖组HepG2细胞ChREBP、SREBP-1c、LPK、DGAT-2 mRNA明显升高,50 μmol/L芒果苷能够下调HepG2细胞ChREBP、LPK、DGAT-2 mRNA的高表达(P＜0.05),但对SREBP-1c mRNA表达影响不明显.结论 芒果苷能够改善高果糖诱导的HepG2细胞内TG的沉积,可能与抑制脂质合成相关基因ChREBP、LPK、DGAT-2 mRNA的表达密切相关.
