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Annexin 1抑制BCG诱导的巨噬细胞RAW246.7细胞炎性应答及凋亡
目的 建立体外结核分枝杆菌感染巨噬细胞模型,探讨膜联蛋白A1(ANXA1)对卡介苗(BCG)菌株诱导的RAW246.7细胞炎性反应及凋亡的调控作用.方法 用BCG感染RAW246.7细胞.用RT-qPCR检测ANXA1、IL-6和TNF-αmRNA表达.Western blot检测ANXA1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及caspase-3的表达;用MTT检测细胞存活率;用ELISA检测细胞的凋亡率;ELISA试剂盒检测细胞因子IL-6和TNF-α的含量.结果 ANXA1在BCG感染的巨噬细胞RAW246.7中明显下调(P<0.05),并呈时间依赖性.ANXA1高表达显著降低BCG刺激诱导的炎性细胞因子IL-6和TNF-α的表达水平(P<0.05).此外,过表达ANXA1明显提高BCG感染的巨噬细胞的存活率(P<0.05),并抑制细胞凋亡,通过上调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达同时下调促凋亡蛋白Bax的表达水平(P<0.05),并降低caspase-3的蛋白表达量(P<0.05).结论 ANXA1能够抑制BCG刺激诱导巨噬细胞的炎性应答进程及凋亡,为结核病的临床研究和治疗提供了理论基础.
关键词： 膜联蛋白A1(ANXA1) 细胞凋亡 炎性应答 结核分枝杆菌 -
可溶型DC-SIGN对LPS诱导THP-1细胞炎性应答的调控作用
目的 探讨可溶型树突状细胞特异性的结合细胞间粘附分子的非整合素(sDC-SIGN)对脂多糖(LPS)刺激的单核细胞炎症反应的调节作用.方法 以人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)为研究对象,分为空白组、200 ng/ml sDC-SIGN单独处理组、LPS单独刺激组、LPS刺激同时加100 ng/ml sDC-SIGN处理组和LPS刺激同时加200 ng/ml sDC-SIGN处理组,刺激后不同时间点收集上清和细胞.ELISA检测细胞上清中细胞因子含量、Q-PCR检测细胞内细胞因子的mRNA表达并利用Western blot方法检测细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)和核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的活化状况.结果 不同浓度的sDC-SIGN均可抑制LPS刺激炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IFN-α的mRNA表达和蛋白分泌,同时促进抑炎细胞因子IL-10的mRNA表达和蛋白分泌,且sDC-SIGN的抑制效果与浓度呈依赖关系;研究结果亦显示,sDC-SIGN减弱LPS刺激THP-1细胞诱导ERK和NF-κBP65的磷酸化水平.结论 sDC-SIGN蛋白对LPS诱导的单核细胞炎症应答具有负向调控作用.
