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敲除IgG受体FcγRⅡB加重小鼠全身及脂肪组织炎性反应
目的 探讨敲除IgG受体基因(FcγRⅡB)在高脂饮食(HFD)诱导下,对小鼠全身及脂肪组织炎性反应以及脂肪组织脂代谢的影响.方法 选取FcγRⅡB+/+雄鼠和IgG受体FcγRⅡB敲除(FcγRⅡB-/-)雄鼠各10只,均给予HFD诱导,17周末处死小鼠,称取小鼠体质量,采集血和脂肪组织.用ELISA、流式细胞计量术和实时定量PCR检测炎性反应及脂代谢相关指标.结果 FcγRⅡB-/-小鼠与FcγRⅡB+/+小鼠相比,血清中炎性因子IL-6、TNF-α和IFN-γ水平明显升高(P＜0.05);脂肪组织巨噬细胞浸润显著增加(P＜0.05);M1型极化基因MCP-1、TNF-α增加( P＜0.05);M2型极化基因ARG和IL-10没有明显差异;体质量、脂肪细胞大小、脂代谢相关基因PPARG、CEBPα、FASn、HSL、ATGL、UCP-1和GLUT4的表达没有差异.结论 HFD诱导下,敲除IgG受体FcγRⅡB加重小鼠全身及脂肪组织的炎性反应,但不影响脂肪组织的脂代谢以及体质量.
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免疫性血小板减少症治疗进展
免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)是由于血小板自身抗体和T细胞功能障碍所致,血小板及其前体巨核细胞均受到攻击导致血小板破坏和生成不足.激素、利妥昔单抗、脾切除术及TPO受体激动剂不能逆转其疾病进程,且因感染、血栓形成等副作用限制了临床应用.新型治疗药物包括:CD154抗体、抑制性FC-γ受体、Syk抑制剂等可以靶向疾病进程的关键步骤,有望限制全身副作用并降低ITP的发病率和患者死亡率.本文就ITP当前治疗策略、新型治疗药物及进一步研究方向进行综述.
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急性免疫性血小板减少症患儿IgG-Fc受体表达变化
目的 探讨小儿急性免疫性血小板减少症(aITP)外周血单核细胞(MC) IgG-Fc受体(FcγR)表达变化.方法 急性ITP患儿组27例,同龄健康对照组25例,流式细胞术检测单核细胞表面活化型受体FcγR Ⅰ及FcγRⅢ表达；荧光定量PCR( real-time PCR)检测MC活化型FcγRⅡa及抑制型FcγRⅡb mRNA表达；酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆IFN-γ、IL-4和IL-10浓度.结果 (1)急性ITP患儿组MC FcγR Ⅰ和FcγRⅢ表达明显高于对照组(P＜0.05)；FcγRⅡa mRNA及FcγRⅡa/FcγRⅡb mRNA比值显著高于对照组及治疗后,经地塞米松治疗后,活化型FcγR Ⅰ、FcγRⅢ、FcγRⅡa mRNA表达下降,抑制型FcγRⅡb mRNA表达增加,FcγR活化型/抑制型平衡逐渐恢复.(2)血浆炎症细胞因子IFN-γ浓度较对照组显著增高；抗炎因子IL-4显著低于对照组.IFN-γ浓度水平与MC FcγRⅡa mRNA表达显著正相关(r=0.79,P＜0.05),IL-4与FcγRⅡb mRNA表达正相关(r=0.84,P＜0.05).结论 单核细胞活化型FcγRs过度表达,抑制型FcγRⅡb表达降低,活化型/抑制型FcγRs表达失衡可能参与儿童急性ITP免疫发病机制,MC FcγRs异常表达可能与细胞因子IFN-γ、IL-4的改变有关,地塞米松治疗可恢复FcγRs活化型/抑制型平衡表达.
关键词： 血小板减少症 FcγRⅡB 活化型/抑制型FcγR 地塞米松 -
天平的两端：活化性和抑制性Fcγ受体
体内多种细胞表达不同类或亚类Ig的Fc受体，它们在促进和调节免疫方面起着重要作用，FcγRⅡB是体内唯一的抑制性Fcγ受体，越来越多的研究表明，FcγRⅡB在自身免疫性疾病的发病中起着重要作用，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎。多项研究表明，细胞表面活化性与抑制性Fcγ受体比例的失调也将导致多种疾病的发生，FcγRⅡB能下调活化性Fcγ受体介导的吞噬、免疫复合物诱导的炎症和相关细胞炎性因子的释放。因此，阐明其与疾病间的联系，将有助于为自身免疫性疾病提供新的治疗策略。
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类风湿关节炎患者外周血B细胞FcγRⅡb表达
目的 探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血B细胞亚群FcγR Ⅱb的表达及其临床意义.方法 流式细胞仪检测20例初治RA患者及年龄性别匹配的15名健康对照者外周血B细胞FcγR Ⅱb的表达;评估其与RA病情指标的相关性.统计学分析采用独立样本￡检验及Pearson相关分析.结果 RA患者记忆性B细胞亚群百分率[(18.30±8.94)％]低于健康对照组[(32.31±13.67)％],差异有统计学意义(t=3.665,P=0.001);初始B细胞亚群百分率[(78.11±9.00)％]高于健康对照组[(64.24±13.23)％],差异有统计学意义(t=-3.691,P=0.001);RA患者外周血CD19+ CD27+记忆性B细胞表面FcγR Ⅱb平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)[(7 571.95 ±4494.53)％]显著低于健康对照组[(13 304.87±6568.19)％],差异有统计学意义(t=3.068,P=0.004);RA患者外周血记忆性B细胞表面FcγR Ⅱb的MFI与RA患者的IgG水平呈负相关(r=-0.732,P=0.007).结论 RA患者外周血记忆性B细胞FcγR Ⅱb表达低于健康对照,并与RA患者的IgG水平呈负相关,FcγR Ⅱb表达异常可能在RA免疫发病机制中起重要作用.
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CpG ODN对哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ、FcγRⅡb表达的影响
目的 观察CpG ODN对哮喘小鼠肺组织FcεR Ⅰ、FcγRⅡb表达的影响,探讨其诱导免疫耐受的相关机制.方法 将48只清洁级雄性Balb/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松(DXM)治疗组(C组)、CpG ODN治疗组(D组),每组12只.以卵白蛋白(OVA)作用建立小鼠哮喘模型.收集支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)计数细胞总数并分类,取肺组织作病理,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中FcεR Ⅰ、FcγRⅡb mRNA的表达.结果 (1)电镜观察肺组织超微结构:B组显示支气管及血管周围有较多炎性细胞浸润,肺泡隔内嗜酸粒细胞浸润,C组和D组与B组相比明显减轻.(2)BALF中炎症细胞表达变化:与B组相比,C组、D组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)绝对值以及EOS占细胞总数的百分比(EOS％)均显著减少(P＜0.01).(3)RT-PCR结果:C组、D组FcεR Ⅰ mRNA表达均显著低于B组(P＜0.01),C组、D组FcγRⅡb mRNA表达均显著高于B组(P＜0.01).(4)相关分析:小鼠肺组织FcεR Ⅰ和FcγRⅡb表达呈显著负相关(P ＜0.01,n=40).结论 CpG ODN能降低哮喘小鼠肺组织FcεR Ⅰ的表达,增加FcγRⅡb的表达,具有改善气道炎症和诱导免疫耐受的作用.
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猪FcγRⅡB多种剪接异构体的基因克隆与序列分析
目的:研究猪FcγRⅡB受体基因选择性剪接的多样性.方法:根据GenBank中猪FcγRⅡB (swFcγRⅡB)cDNA基因序列(DQ026064),应用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,应用RT-PCR技术,从不同个体的猪肺泡巨噬细胞中扩增FcγRⅡB基因并进行测序分析,在GenBank中查找猪FcγRⅡB DNA序列(NW-001886241.1),并用相关软件分析其外显子组成.结果:共克隆出6个转录体,其中转录体2,4在信号肽部分都有一个丙氨酸的缺失.转录体5,6是两个新型的FcγRⅡB 转录体,转录体5胞外区只有一个Ig结构域,转录体6是一个只含有一个Ig结构域的推导性可溶性Fc受体.结论:猪FcγRⅡB的表达因RNA选择性剪接方式不同而呈现出多样性.
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系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞FcγⅡb和血清sCD30水平变化与Th1/Th2细胞漂移关系的研究
目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)FcγRⅡb、CD30的表达与辅助T细胞亚型(Th1/Th2)漂移在SLE发病机制中的作用.方法 检测了129例SLE患者和30名健康对照者PBMCFcγRⅡb、Th1、Th2细胞以及血清sCD30;FcγRⅡb的检测采用流式细胞术,血清sCD30的检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA),Th1、Th2细胞的检测采用免疫组化染色方法.结果 SLE患者与健康对照者相比,PBMC FcγRⅡb的表达以及Th1细胞明显降低(P＜0.01),而血清sCD30水平以及Th2细胞显著升高(P＜0.01).结论 PBMC FcγRⅡb、CD30表达的变化以及Th1/Th2细胞漂移与SLE发病机制有关.
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牙周炎及不良妊娠结局与FcγRⅡB基因多态性的关系
牙周炎是不良妊娠结局(adverse pregnancy outcomes,APO)的危险因素,两者都与FcγRⅡB基因多态性有关,推测牙周炎与APO有关的背后机制是FcγRⅡB基因多态性的作用.本文就牙周炎、APO及FcγRⅡB基因多态性的关系作一综述,并为后续牙周炎与不良妊娠结局相关机制的研究提供依据.
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FcγRⅡB与系统性红斑狼疮
FcγRⅡB是相对分子质量为40 000的IgG低亲和力受体,FcγRⅡB的胞浆区含有以酪氨酸为基础的抑制小体ITIM(Immunoreceptor Tyrosinesed Inhibition Motif),有抑制淋巴细胞活化的作用.FcγRⅡB表达下降时产生免疫复合物的清除功能障碍,FcγRⅡB表达缺陷是系统性红斑狼疮(SLE)的重要易感因素.
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FcγRⅡb与狼疮性肾炎病理活动的相关性
肾脏是系统性红斑狼疮(SLE)常累及的脏器,肾小球、肾小管、肾间质和肾血管均可受累,迄今为止仍是SLE的主要致死原因之一.狼疮性肾炎(LN)的发生机制不十分清楚.FcγRⅡb为免疫球蛋白超家族成员,是低亲和力的FcγR,本研究旨在探讨LN患者肾组织中FcγRⅡb的表达及其与LN活动性的关系.
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上调巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能
目的 构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用.方法 以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒.将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒调节质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和调节病毒,测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度.表达病毒和调节病毒共感染巨噬细胞,经梯度浓度强力霉素(DOX)诱导,免疫荧光技术检测巨噬细胞FcγRⅡB表达,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达.经不同浓度DOX诱导后的腹腔巨噬细胞分别检测吞噬和趋化功能.结果 重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确.表达和调节病毒滴度均达到106转导单位/mL.巨噬细胞被病毒感染后经DOX诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示,FcγRⅡB能够在巨噬细胞表达;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示FcγRⅡB表达水平与DOX浓度呈正相关.巨噬细胞的吞噬和趋化功能与FcγRⅡB表达呈负相关.结论 调节巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能.
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上调小鼠骨髓来源树突状细胞FcγRⅡb表达可抑制其抗原提呈功能
目的 构建FcγRⅡb慢病毒载体,感染小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),观察BMDC抗原提呈功能变化.方法 小鼠骨髓细胞中提取RNA,反转录后进行PCR扩增得到FcγRⅡb目的基因,将FcγRⅡb基因插入慢病毒表达载体TRE中构建FcγRⅡb重组慢病毒载体.HEK293T细胞包装慢病毒,体外进行小鼠BMDC的诱导培养及鉴定.将慢病毒感染BMDC后,实时定量PCR检测BMDC中FcγRⅡbmRNA水平,Western blot法检测BMDC中FcγRⅡb蛋白水平,流式细胞术分析BMDC表面分子CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的变化.结果 成功构建FcγRⅡb重组慢病毒载体,经酶切、PCR鉴定及测序鉴定成功.体外诱导培养BMDC,可见细胞表面大量树枝样突起形成.包装慢病毒感染BMDC后,FcγRⅡb mRNA和蛋白水平均较未感染BMDC增高.流式细胞术分析感染后BMDC表面分子CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的表达量均较未感染BMDC下降.结论 DC上FcγRⅡb的过表达能够下调其抗原提呈功能.
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含人FcγRⅡB基因慢病毒的制备及其在HT-1080细胞中的表达
目的 构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达.方法 以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒.将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和可诱导病毒,分别测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度.表达病毒和可诱导病毒共感染HT-1080细胞,经梯度浓度强力霉素(Dox)诱导,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,免疫荧光染色检测HT-1080细胞FcγRⅡB表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达.结果 重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定,测序结果显示插入片段碱基序列与GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100％.表达病毒滴度达106 TU/mL,可诱导病毒滴度达105 TU/mL,感染性良好.HT-1080细胞被病毒感染后经Dox诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示FcγRⅡB能够在HT-1080细胞中表达;实时荧光定量PCR和Western blot法结果显示FcγRⅡB表达水平与诱导剂浓度正相关.结论 成功制备了FcγRⅡB慢病毒,感染HT-1080细胞后可实现FcγRⅡB的诱导表达.
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化疗可增加肺鳞状细胞癌患者外周血中FcγRⅡB含量
目的 检测肺鳞状细胞癌患者化疗前后外周血单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB表达水平、血清中可溶性FcγRⅡB(sFcγRⅡB)及其抗体的含量.方法 免疫荧光技术检测鳞状细胞癌患者化疗前后单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB的表达和定位、实时定量PCR检测FcγRⅡBmRNA水平,Western blot法检测sFcγRⅡB蛋白水平;ELISA检测鳞状细胞癌患者化疗前后、健康人血清中sFcγRⅡB总量、与IgG结合的sFcγRⅡB(sFcγRⅡB-IgG)、抗FcγRⅡB自身抗体的含量变化.结果 与健康人相比,鳞状细胞癌患者化疗前单核细胞和B细胞FcγRⅡB的水平、sFcγRⅡB总量及抗FcγRⅡB自身抗体的含量明显降低,化疗后高于化疗前;sFcγRⅡB-IgG含量高于健康人,化疗后低于化疗前.结论 鳞状细胞癌患者FcγRⅡB含量减少,化疗后FcγRⅡB表达有所增加.
