首页 > 文献资料
-
FQ-PCR溶解曲线技术分析白血病患者PBMC中T细胞TCRα/βCDR3谱系特征
目的 采用FQ-PCR溶解曲线技术分析临床白血病患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TRAV和TRBV基因各家族的CDR3谱系特征.方法 提取4例健康志愿者和15例临床白血病患者PBMC中mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因家族的CDR3区,FQ-PCR溶解曲线技术分析CDR3谱系特征,并测序分析单克隆家族CDR3区氨基酸序列的组成.结果 4例健康志愿者PBMC中α/βT细胞的CDR3谱系FQ-PCR溶解曲线峰型图,均表现为多峰图;而15例白血病患者PBMC中α/βT细胞CDR3谱系FQ-PCR溶解曲线峰型图,多数患者出现寡或偏峰型图、低或无峰型图、典型的单峰型图;不同白血病患者异常峰的频率不一致;单峰型图TRAV和TRBV PCR产物基因测序,未发现不同患者存在完全相同的CDR3区.结论 FQ-PCR溶解曲线技术能很好的分析白血病患者PBMC中TCR α/β CDR3谱系的单、寡、多克隆性增殖;非T细胞白血病患者PBMC中TCRα/β CDR3的单峰(或寡峰)家族T细胞,可能来源于机体对肿瘤应答的T细胞,而在T细胞白血病患者,可能为肿瘤T细胞或机体抗肿瘤T细胞.本实验可为进一步研究白血病的免疫应答机制和个体化治疗提供基础.
-
一例弥漫性大B淋巴细胞瘤组织样本T细胞TCR α/β CDR3谱序的初步分析
目的 FQ-PCR溶解曲线法初步分析1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者组织标本中T细胞TRAV和TRBV基因各家族CDR3谱序.方法 提取4例淋巴结增生组织和1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者的mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因的CDR3区,利用FQ-PCR技术了解其克隆性,溶解曲线单峰家族基因测序分析CDR3区基因和氨基酸序列.结果 该例淋巴瘤患者淋巴结组织T细胞FQ-PCR溶解曲线分别在TRAV10、TRAV18和TRBV6、TRBV24家族中出现单峰表现,其CDR3区氨基酸序列为CAGANFGNEKLTFGTGTCR、CAPSFSGYSTLTFGKGTM、CASSERGQPQHFGDGTCR、CATTPAGEYYGYTFGSGTCR,4例增生淋巴结组织FQ-PCR溶解曲线均为寡峰和多峰.结论 该例淋巴瘤组织中FQ-PCR溶解曲线单峰家族的T细胞可能为高应答T细胞,本实验为进一步研究淋巴溜的免疫应答机制和个体化治疗提供了研究基础.
关键词： 弥漫性大B淋巴细胞瘤 TCR CDR3 FQ-PCR溶解曲线分析技术 -
通痹合剂乙酸乙酯部位调节活化T细胞双信号分子的机制研究
目的:明确通痹合剂抑制T淋巴细胞活化的活性部位,研究其对T细胞双信号分子的影响,阐明通痹合剂免疫调控作用的机制.方法:分离大鼠淋巴细胞,加入通痹合剂不同提取部位,ConA刺激48 h,流式细胞术(FCM)检测CD3阳性细胞表达CD71；加入不同浓度通痹合剂乙酸乙酯部位和甲氨蝶呤(MTX),ConA刺激48 h,FCM检测T细胞表达TCR、CD28和ICOS.结果:ConA刺激后CD3阳性细胞表达CD71显著上调至69.7％,通痹合剂乙酸乙酯部位(TBHJ)可抑制CD3+ CD71+表达(32.5％)；ConA刺激T细胞表达TCR、CD28和ICOS明显升高,与阴性对照组(Control)有非常显著性差异(P ＜0.001),TBHJ可明显抑制T细胞表达TCR、CD28和ICOS,尤其抑制ICOS作用较强,呈浓度依赖效应；MTX可明显抑制T细胞表达TCR、CD71.结论:TBHJ可明显抑制T淋巴细胞活化,其对T细胞活化的双信号分子途径均有下调作用,尤其以抑制ICOS明显,提示TBHJ可通过阻断CD28-ICOS第二信号途径,诱导免疫耐受.本研究为通痹合剂治疗类风湿性关节炎等自身免疫性疾病提供了实验依据.
关键词： 通痹合剂乙酸乙酯部位 T淋巴细胞 TCR CD28 ICOS -
APL相关TCR Vα 6、Vα10和Vβ23寡克隆T细胞CDR3序列分析
目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周m TCR Vα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点.方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCR Vα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR3长度,了解其克隆性;寡克隆的PCR产物再进行CDR3区序列分析.结果:该例APL患者外周血T细胞分别在TCR Vα6、Vα10和Vβ23亚家族中出现寡克隆性增殖T细胞,经序列分析显示TCR Vα6、Vα10和Vβ23亚家族基因序列分别为Vα6NJα17、Vα10NJα35和Vβ23NDβ1NJβ2.7,其CDR3区氨基酸序列分别为CAMRENSAGNK,YLCAGDELLWECA,CASSSKWAG-GTYEQY,该3个TCR基因已被GenBank收录(登陆号:EU544946、EU544947和EU647219).结论:APL患者外周血T细胞出现的TCR Vα6、Vα10和Vβ23克隆性增殖T细胞可能是机体对抗白血病细胞所引起的抗原特异性免疫反应;这3个独特TCR重排序列将进一步作为开展APL特异性免疫治疗研究提供资料.
-
实时定量RT-PCR检测TCR Vγ亚家族基因表达水平
目的:建立SYBR Green Ⅰ实时定鼍检测TCR Vγ亚家族T细胞表达水平的比较Ct法.方法:利用倍比稀释的成人正常胸腺组织cDNA建立TCR VγⅠ-VγⅢ和B2微球蛋白基因(β2M)基因的相对标准曲线,实验证实靶基因(VγⅠ-VγⅢ)分别和看家基因(B2M)的扩增效率一致,可采用比较Ct法对TCR Vγy Ⅰ～VγⅢ的表达进行相对定量,并运用该方法检测20例健康成人外周血TCR VγⅠ～VγⅢ的表达水平.结果:成人外周血 TCR VγⅡ的表达茸高,TCR VγⅠ次之,TCRVγⅢ的表达量低,三者比较有统计学意义(P<0.05).结论:本研究率先建立了利用sYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测人TCR Vγ基因mRNA表达水平比较Ct法,并在国内首先提供了健康成人外周血TCR Vγ基因各亚家族mRNA表达水平的资料.
关键词： 实时荧光定量RT-PCR 比较Ct法 TCR -
MSM HIV感染者特异性T细胞TCR αCDR3谱序初探
目的 监测HIV感染者的外周血样本TCR α链CDR3谱系变化,发现HIV特异性TCR TRAV家族.方法 用本实验室已建立的“荧光定量PCR溶解曲线法监测HIV感染者TCR CDR3谱系漂移技术”,对22名健康男性、19名MSM HIV感染者的外周血样本TCR α链CDR3变化进行监测.结果 MSM HIV感染者的TRAV4.2,TARV10和TRAV23的单(寡)性表达频率要高于健康男性人群(P＜0.05),MSM HIV感染者的TRAV亚家族的缺失率(1.70％)虽然高于对照男性健康人群的TRAV亚家族的缺失率(0.80％),但二者没有统计学差异.结论 在国内首次利用“荧光定量PCR溶解曲线法”监测HIV感染者TCR α链CDR3漂移变化,发现MSM HIV感染者的TCR AV家族存在单(寡)性增生和缺失现象,非正态分布现象增加,多样性减少.
