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MEF2C调控DOK5基因的表达
目的 研究MEF2C对DOK5的表达调控机制.方法 用RT-PCR法检测小鼠中DOK5组织表达谱,检测P19CL6向心肌细胞分化过程中DOK5和MEF2C的表达.MEF2C与DOK5启动子报告基因共转染P19CL6细胞或将DOK5启动子上的MEF2结合位点突变后,观察报告基因活性的变化.结果 DOK5在小鼠的脑、心脏、骨骼肌等高表达.DOK5和MEF2C在P19CL6向心肌细胞分化过程中mRNA表达水平升高(P<0.05).过表达MEF2C可以激活DOK5启动子区的报告基因活性,而MEF2结合位点突变则抑制DOK5启动子区报告基因活性.结论 MEF2C可以通过作用于DOK5启动子区的MEF2结合位点,调节DOK5的转录活性.
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维甲酸诱导的神经管缺陷小鼠模型中神经系统相关基因的表达
目的 研究在全反式维甲酸诱导小鼠神经管畸形模型中神经系统相关基因(ASH2L、HDAC4、NSPC1与DOK5)的表达变化.方法 取8只E8.5的C57/BL6孕鼠随机均分为对照组和模型组.给对照组腹腔注射橄榄油,给模型组腹腔注射全反式维甲酸；E13.5取胚胎.用real-time PCR检测两组小鼠脑和脊髓中ASH2L、HDAC4、NSPC1与DOK5的mRNA表达；用Western blot检测蛋白表达.结果 全反式维甲酸可诱导小鼠出现典型神经管畸形；与对照组相比,致畸胚胎脑和脊髓中,ASH2L、HDAC4、NSPC1和DOK5的mRNA和蛋白水平显著下降(P＜0.05).结论 ASH2L、HDAC4、NSPC1和DOK5可能是抑制全反式维甲酸致神经管畸形的潜在基因.
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Dok5基因3'非编码区(3'UTR)的多态性与我国汉族2型糖尿病关系的初步研究
目的 在胞浆接头蛋白Dok5基因3'非编码区(3'UTR)筛查与我国汉族2型糖尿病(T2DM)相关的单核苷酸多态性(SNP).方法 从493例T2DM患者及573例健康体检者外周血中提取DNA,特异性扩增Dok5基因3'UTR并进行测序,分析筛查出的SNPs的等位基因及基因型频率.结果 共检测到4种SNPs,分别为rs2842(G＞ A)、rs2841(G＞A)、rs15899 (T＞C)及rs2843(C＞G),只有rs2841的等位基因及基因型频率在两组间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在Dok5基因3'UTR区鉴定出4个SNPs位点,其中rs2841可能是我国汉族2型糖尿病的功能性易感位点.
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Dok4和Dok5 PTB结构域融合蛋白的表达和纯化
目的: 制备Dok4和Dok5 PTB结构域的GST融合蛋白.方法: 用PCR方法分别扩增编码Dok4、Dok5 PTB结构域的cDNA, 并将其克隆入表达载体pGEX-4T-3 中,转化大肠杆菌BL-21,构建成表达GST-PTB融合蛋白的菌株.经IPTG诱导表达后,经Glutathion-Sepharose 4B亲和层析柱纯化,用SDS-PAGE进行分析,该融合蛋白的表达量超过菌体总蛋白的25%.结果: 获得重组的 GST-4PTB和GST-5PTB融合蛋白,纯度在95%以上,产物得率约75%. 结论: 成功制备高纯度Dok4和Dok5 PTB结构域的GST融合蛋白,为进一步研究磷酸化酪氨酸结合结构域(PTB)的结构和生物学功能奠定基础.
