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抑制自噬增强MCF-7乳腺癌细胞对依托泊苷的敏感性
目的 探讨自噬抑制剂(Baf)在乳腺癌MCF-7细胞对依托泊苷(VP-16)的药物敏感性的影响.方法 实验分为对照组(NC)、Baf组、VP-16和VP-16+ Baf组.用MTT法检测细胞生存活力、GFP-LC3质粒转染后荧光显微镜检测绿色荧光的分布、Western blot检测蛋白表达和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 15μmol/L的VP-16使细胞活力降低,而在收集细胞前12 h时加入10 nmol/L的Baf进一步降低了细胞活力(P ＜0.01);VP-16明显增加MCF-7细胞的LC3Ⅱ的表达和GFP-LC3绿色荧光斑点的聚集,而减少了P62的蛋白表达;与VP-16组比较,VP-16+ Bar组细胞P62的蛋白表达增多,凋亡蛋白cleaved-PARP的表达和细胞凋亡比例也明显增多(P＜0.01).结论 VP-16抑制乳腺癌细胞增殖的过程中诱导了保护性自噬,抑制自噬促进了凋亡性死亡,可以增加癌细胞对VP-16的敏感性.
关键词： 依托泊苷 自噬 Bafilomycin A1 凋亡 乳腺癌细胞 -
β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞自噬及其对V-ATPase表达的影响
[目的]探讨β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞产生自噬及与V-ATPase变化的关系.[方法]将HT22细胞分为对照组、无血清培养组、Aβ处理组和Aβ+ Bafilomycin A1组,不同浓度的Aβ25-35作用于HT22细胞24 h,用CCK8测定细胞活力变化,免疫细胞荧光检测自噬斑点变化,及Western blot检测LC3、V-ATPase蛋白变化.[结果]Aβ可以诱导HT22细胞出现明显的自噬现象,且这种自噬同Aβ的浓度以及作用时间具有一定的相关性.V-ATPase的表达伴随自噬的增多也逐渐增多.Bafilomycin A1可以进一步诱导V-ATPase增加,增加细胞内自噬体的聚积.[结论]Aβ25-35可诱导HT22细胞产生自噬,且与V-ATPase表达有关.
