您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
硫酸化胆汁酸水解酶文献资料
-
硫酸化胆汁酸水解酶基因BSS H1克隆、表达及活性
目的 从铜绿假单胞菌克隆出硫酸化胆汁酸水解酶(BSS)基因,并表达蛋白产物、研究其活性.方法 通过序列比对确定铜绿假单胞菌中的目的序列BSS H1；通过PCR扩增获得BSS H1基冈全序列,将其插入pET30b(+)载体,并将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.通过优化诱导表达条件,实现重组蛋白BSS H1的高效表达；通过BSS-HSD酶联法初步研究其酶活性质.结果 工程菌扩大培养3h、以终浓度为1 mmol/L IPTG诱导5h时蛋白表达量高；研究发现BSS H1能催化底物生成3α和3β两种构型的羟基胆汁酸,在pH 8.5时,其活性分别是(632±65) U/L和(52±4) U/L.结论 成功构建BSS H1高效表达菌株.BSS H1能催化生成两种立体异构体的特性在其他BSS中未见报道,其机制尚不明确,值得深入研究.
