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生长因子受体结合蛋白-2抑制肠癌细胞HT29增殖
目的 研究Grb2 shRNA转染对肠癌细胞HT29增殖相关信号通路的影响,探讨以Grb2为肠癌治疗靶点的可行性.方法 应用shRNA慢病毒质粒系统,将Grb2 shRNA转染至293T细胞,获得5株不同序列Grb2 shRNA慢病毒颗粒,并感染肠癌HT29细胞,分别获得的5株感染Grb2 shRNA慢病毒颗粒的肠癌HT29细胞系为实验组(即感染Grb2 shRNA的细胞HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-70、HT29/shGrb2-71、HT29/shGrb2-72、HT29/shGrb2-73),以eGFP shRNA慢病毒感染肠癌HT29细胞为阴性对照组.MTT法检测细胞增殖情况,RT-PCR检测Grb2 mRNA表达,Western blot检测Grb2、P42/44 ERK、磷酸化P42/44 ERK、Akt、磷酸化Akt(P-Akt)和STAT5等信号通路分子表达的改变.结果 感染shGrb2病毒72 h,HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73两株细胞在mRNA和蛋白水平均出现抑制现象.HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73细胞在感染后24h A值分别为0.176±0.045,0.186±0.013,感染48 h后为0.347±0.048、0.382±0.041均显著高于空白对照、阴性对照(P ＜0.001),72 h为0.934±0.038、0.983±0.205高于空白对照、阴性对照(P＜0.01);感染后72 h,phospho-P42/44 ERK、Akt、phospho-Akt明显下降,而ERK、STAT5表达不受影响.结论 在HT29细胞,Grb2 mRNA和蛋白水平上明显抑制,可诱导HT29细胞增殖和相关信号传导通路分子表达下调.
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GRB2和Ki-67蛋白表达水平变化与结直肠癌发病相关性分析及其意义
目的 探讨生长因子受体结合蛋白2(GRB2)、仅存在于增生细胞中的核蛋白(Ki-67)在结直肠癌患者中的变化及其临床意义.方法 选取确诊的结直肠癌患者组织标本100例(病灶组)、癌旁组织标本50例(癌旁组),健康对象50例(对照组)进行回顾性研究,收集时间2015年2月至2017年7月.检测病灶组和癌旁组标本中的GRB2与癌症患者与健康对象血清中Ki-67蛋白水平,并分析其与临床病理学特征的关系及在临床治疗中的意义.结果 结直肠癌组织中胞浆GRB2的表达显著高于癌旁组织(P <0.05),而结肠癌组织、癌旁组织中胞核GRB2中的表达水平差异无统计学意义(P >0.05);胞浆GRB2的表达情况与清扫淋巴结个数有关(P <0.05);病灶组Ki-67蛋白阳性表达率是82%,高于对照组阳性率,有淋巴结转移者比无淋巴结转移的阳性表达率明显增高(P <0.05).结论 GRB2、Ki-67蛋白在结直肠癌组织中高表达,并且与肿瘤的发生发展关系密切.
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Grb2的抑制在抗肿瘤治疗中的意义
生长因子受体连接蛋白-2(Grb2)是一种广泛表达的衔接蛋白,在多种肿瘤细胞中过度表达,对肿瘤的发生和发展具有重要影响,从而成为肿瘤治疗的靶向位点之一.因此,抑制Grb2在抗肿瘤治疗中具有广泛前景.
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Grb2抑制剂对K562细胞生长增生的影响
目的 探讨针对Grb2-SH3的抑制剂peptidimer-c对K562细胞生长增生的影响.方法 应用N端基团保护的Fmoc化学,固相合成针对Grb2-SH3的二聚肽peptidimer-c,高压液相色谱技术(HPLC)分析肽的纯度,质谱法分析肽的结构,应用pull-down实验,观察peptidimer-c与K562细胞裂解物中Grb2分子的结合.应用锥虫蓝拒染法、WST-1法、克隆形成法观察peptidimer-c对K562细胞生长的抑制.通过克隆形成实验,探讨peptidimer-c与常用的CML治疗药物甲磺酸伊马替尼(商品名:格列卫)、羟基脲及阿糖胞苷联合应用的合并效应.结果 HPLC图谱上只见一样品峰而无其他杂峰.质谱分析显示,所合成的化合物与设计的肽是一致的.pull-down结果显示,peptidimer-c可与K562细胞中的Grb2分子特异性结合.锥虫蓝计数法结果提示,peptidimer-c可明显抑制K562细胞的生长,且在加药后短时间内(3～6h)即有明显作用,其对K562增生的抑制呈浓度依赖型,而非时间依赖型.WST-1检测结果显示,peptidimer-c杀伤K562细胞的半致死剂量为(17±2)μmol/L.几种化合物对K562克隆形成抑制的半致死剂量分别为:peptidimer-c(3.9±0.9)μmol/L,伊马替尼(0.03±0.02)μmol/L,羟基脲(15±7)μmol/L,阿糖胞苷(0.014±0.012)μmol/L.peptidimer-c分别与伊马替尼、阿糖胞苷、羟基脲联合应用时,对K562克隆形成抑制均表现为相加作用或协同作用,其中1.5 μmol/L peptidimer-c与0.05 μmol/L伊马替尼联合应用,表现协同作用,1.5 μmol/L peptidimer-c与0.006 μmol/L阿糖胞苷或0.01 μmol/L阿糖胞苷联用,也显示协同抑制效应.结论 peptidimer-c能有效抑制K562细胞的生长和增生.与其他类型的药物合用,表现为相加或协同效应,可提高抗肿瘤效应.
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异鼠李素抑制人胃癌细胞表皮生长因子受体途径
目的 通过体外试验研究异鼠李素抑制人胃癌SGC-7901细胞生长的表皮生长因子受体(EGFR)信号途径.方法 分别用0.8×10-4,1.2×10-4,2.4×10-4mol/L的异鼠李素、10%的RPMI 1640、0.048mol/L氟尿嘧啶处理SGC-7901细胞24h后收集细胞,计活细胞数,计算生长抑制率;用Lipofect转染法将EGFR或生长因子受体结合蛋白2(grb2 antisense)分别转入胃癌SGC-7901细胞中,用RT-PCR法分别检测EGFR和grb2 mRNA的表达水平;采用磷酸钙-DNA沉淀转染法测定AP-1活性.结果 0.8×10-4 1.2×10-4,2.4 x 10-4 mol/L异鼠李素和0.048mol/L氟尿嘧啶处理24h后对细胞生长的抑制率分别为55.06%,62.03%,66.46%.70.25%.3个剂量异鼠李素处理细胞后EGFR、grb2 mRNA表达水平、AP-1活性均明显下降,且随着剂量的增加而下降.EGFR、grb2 antiense分别转入SGC-7901细胞后,用2.4×10-4mol/L异鼠李索处理24h,阻断EGFR后转染细胞grb2的表达和AP-1活性比未转染的分别提高了62.79%和60%(P<0.05);阻断grb2后转染细胞AP-1活性比未转染的提高36%(P<0.05),而EGFR mRNA表达水平无显著变化(P>0.05).结论 异鼠李素是通过抑制EGFR信号转导途径的激活抑制人胃癌SGC-7901细胞生长.
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人结直肠癌组织中EGFR/Grb2/p-mTOR/VEGF的表达及意义
目的:观察人结直肠癌组织磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)、表皮生长因子受体(EGFR)、生长因子受体结合蛋白2 (Grb2)和血管内皮生长因子(VEGF)等的表达,并探讨其可能的临床意义.方法:构建含有185例结直肠癌标本的组织芯片,免疫组化法检测结直肠癌组织及癌旁组织中EGFR、Grb2、p-mTOR和VEGF的表达,并分析不同结直肠癌临床病理学特征下(如年龄、性别、浸润深度、淋巴转移、临床分期和分化程度)各自的表达情况,探讨可能的临床意义.结果:EGFR、Grb2、p-mTOR和VEGF在结直肠癌旁组织中呈少量表达或不表达,在结直肠癌组织中的表达率分别为21.1%、44.9%、42.2%和54.1%,明显高于癌旁组织(P<0.05).结直肠癌患者不同性别、年龄、肿瘤分化程度下EGFR、Grb2、p-mTOR和VEGF表达率无统计学差异;不同浸润深度和临床分期下EGFR的表达率有统计学差异(P<0.05);不同浸润深度、淋巴转移和临床分期下p-mTOR、VEGF表达率均有统计学差异(P<0.05).结直肠癌组织EGFR/Grb2/p-mTOR/VEGF蛋白两两间均有一定的相关性(r=0.245～0.567,P<0.05).结论:EGFR、Grb2、p-mTOR和VEGF表达与结直肠癌的发生、发展相关,值得进一步研究以作为结直肠癌肿瘤靶向治疗新的作用靶点.
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利用TCGA数据库分析GRB2在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
目的 分析GRB2在肝细胞肝癌(HCC)中的表达与HCC患者临床特征及预后的相关性,进而预测GRB2与HCC发生发展的关系.方法 从癌症基因组图谱(TCGA)中选取HCC中GRB2的基因表达谱及相关临床和病理资料,分析GRB2在HCC癌组织和癌旁组织中的表达情况以及HCC癌组织中GRB2表达量与HCC患者临床特征及预后的关系.结果 GRB2在HCC癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05).GRB2表达水平与HCC临床病理分级、TNM分期、血清甲胎蛋白(AFP)水平相关,HCC临床病理分级、TNM分期、血清AFP水平越高,GRB2表达量越高(P<0.05).COX多因素分析显示GRB2高表达和TNM分期是影响HCC患者预后的独立危险因素.结论 GRB2可作为促癌基因在HCC患者的肿瘤组织中呈高表达,提示HCC患者预后不良,有望成为早期诊断HCC的分子标志物和判断预后的指标.
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Grb2和mTOR在胃癌中的表达
目的 探讨胃癌组织中Grb2和mTOR的表达及其与胃癌临床病理因素和预后的关系.方法 应用免疫组织化学法观察326例胃癌组织中Grb2和mTOR的表达特点,结合临床病理资料进行统计学分析.结果 Grb2 和mTOR在正常胃黏膜上皮和管状腺瘤组织中未见阳性染色或仅少量细胞呈淡黄色.167例(51.2%)胃癌组织Grb2 染色阳性,其中79例Grb2 高表达,Grb2 表达与胃癌肿瘤大小、浸润深度及临床分期有关(P<0.05).175例(53.7%)胃癌组织mTOR染色阳性,其中高表达92例,mTOR表达与胃癌肿瘤大小、浸润深度、分化程度、淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05).两者表达具有高度的一致性(P<0.01),且均与预后有关.结论 Grb2 和mTOR在胃癌中出现异常表达,两者可能共同促进了胃癌的发生及发展,可作为胃癌治疗的靶点.
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Grb2在MCF-7 乳腺癌细胞中的核定位研究
目的构建Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1-C/Grb2,并观察Grb2在MCF-7乳腺癌细胞的核定位情况.方法用PCR方法扩增Grb2 cDNA,与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed1-C重组构建融合蛋白表达质粒pDsRed1-C/Grb2,酶切、测序鉴定后,瞬时转染MCF-7 乳腺癌细胞株,用荧光显微镜观察Grb2的核定位情况.结果 pDsRed1-C/Grb2质粒有正确的阅读框,融合表达蛋白DsRed1-C/Grb2可定位于MCF-7 乳腺癌细胞核内.结论成功构建了Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1-C/Grb2,在MCF-7 乳腺癌细胞株中,Grb2除存在于胞浆外,也可定位于细胞核内,可能与其参与核内基因的转录调控有关.
关键词： Grb2 MCF-7 乳腺癌细胞 核定位
