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RIP-Chip文献资料
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利用RIP-Chip筛选结合多聚胞嘧啶结合蛋白2的microRNAs
目的 通过核糖核蛋白免疫沉淀-芯片技术(RIP-Chip)在人正常神经胶质细胞(HA)和神经胶质瘤细胞(T98G和U87MG)中筛选与多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)相互作用的microRNA(miRNA).方法 选择兔抗人PCBP2抗体,用Western blot法检测PCBP2蛋白在HA、T98G和U87MG细胞中的表达.用兔IgG作为阴性对照,收集3种细胞的RIP蛋白和RNA样品,通过Western blot检测PCBP2蛋白富集效果,利用NanoDrop定量并经Agilent2100检测RNA完整性.选择Affymetrix miRNA 3.0芯片对RNA样品进行杂交,筛选富集4倍以上且P＜0.05的miRNA.结果 用PCBP2抗体进行RIP-Chip实验,终筛选和PCBP2相互作用的103条miRNA,1条前体miRNA和1条核仁小分子RNA;其中15条存在PCBP2的结合位点.结论 PCBP2可以通过识别靶序列或者以核糖核蛋白复合物形式在细胞内结合成熟的miRNA、前体miRNA或核仁小分子RNA.
