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利用CRISPR/CAS9技术构建QKI敲除GC1-spg细胞株及其生物学功能检测
目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建QKI敲除的GC1-spg细胞株,并在体外研究QKI对GC1-spg细胞增殖和分化的影响.方法 利用CRISPR/Cas9系统的PX330质粒构建敲除QKI的重组质粒,转染GC1-spg野生型细胞,加入嘌呤霉素进行筛选,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)和基因测序鉴定出GC1-spg敲除QKI细胞株;常规培养野生型和敲除细胞株,利用细胞计数检测试剂盒(CCK8)绘制增殖曲线和荧光定量PCR(q-PCR)检测减数分裂相关基因变化.结果 本研究成功构建出QKI敲除GC1-spg细胞株,与对照组相比,QKI敲除细胞株的增殖明显下降(P<0.05),减数分裂相关分子标志基因c-kit、Mtl5和Hspa2表达量明显降低(P<0.05).结论 QKI蛋白可以影响GC1-spg的增殖和分化,因此QKI蛋白可能通过影响增殖和分化而影响精子发生.
关键词： CRISPR/Cas9 GC1-spg QKI 精子发生 -
肾透明细胞癌QKI、HIF-1α的表达及相关性研究
目的 研究QKI、HIF-1α在人肾透明细胞癌中的表达及其相关性,探讨QKI、HIF-1α的表达与肾透明细胞癌病理分级、浸润深度及临床分期的关系.方法 收集110例肾透明细胞癌和10例正常肾组织石蜡包埋标本作为研究对象,采用免疫组化SABC法检测QKI、HIF-1α的表达和分布,并应用图象分析仪判定,统计学处理,对肾透明细胞癌的病理分级、浸润深度及临床分期进行对比分析及相关性研究.结果 QKI在肾透明细胞癌中的阳性表达率为67.3％,正常肾组织为100％,差异有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α在肾透明细胞癌中的阳性表达率为92.7％,正常肾组织为30％,统计学有显著性差异(P＜0.01).在肾透明细胞癌中QKI的表达强度与病理分级(r=-0.471,P＜0.001)、浸润深度(r=-0.392,P＜0.001)、TNM分期(r=-0.451,P＜ 0.001)均为线性负相关;HIF-1α的表达强度与病理分级(r=0.404,P＜ 0.001)、浸润深度(r=0.324,P=0.001)、TNM分期(r=0.330,P＜ 0.001)均为线性正相关.QKI与HIF-1α表达强度具有统计学差异(P=0.002),并呈线性负相关性(r=-0.417,P=0.002).结论 QKI的表达与肾透明细胞癌病理分级、浸润深度及临床分期呈负相关性,而HIF-1α的表达与其呈正相关性,在发病机制中可能涉及到QKI、HIF-1α的异常表达.同时,作为新的分子标志物,QKI、HIF-1α可作为判定肾透明细胞癌恶性程度、进程及预后的一项有价值的生物学指标,对临床诊治也可提供有意义的帮助.
