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人牙周韧带细胞成骨诱导分化后的超微结构观察
目的 观察成骨诱导分化培养前后,人牙周韧带细胞超微结构的变化.方法 对人牙周韧带细胞进行体外培养,并进行成骨诱导分化,14d后行透射电子显微镜观察.结果 体外成骨诱导分化培养后,人牙周韧带细胞内细胞器发达,数目较常规培养条件下明显增多.细胞内可见大量的基质小泡、髓样结构及中、低电子密度的圆形和椭圆形小泡样结构.结论 人牙周韧带细胞是一种具有成骨潜能的细胞,经成骨诱导分化培养后,其超微结构具有成骨细胞和成牙骨质细胞的特点.
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人牙周韧带细胞成骨分化的差异表达蛋白质组学研究
目的 获得人牙周韧带细胞诱导成骨分化通路中的调节蛋白,探讨牙周韧带细胞诱导成骨分化的分子机制.方法 应用胶内差异双向电泳结合基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱鉴定等蛋白质组学技术筛选人牙周韧带细胞诱导成骨分化的差异表达蛋白质组.结果 获得人牙周韧带细胞诱导成骨分化7 d的差异表达蛋白质图谱,确认有显著差异的蛋白质斑点61个,质谱鉴定29个蛋白质,包括细胞骨架蛋白及细胞骨架相关蛋白、膜结合蛋白、核蛋白、基质合成、代谢酶和信号传导等蛋白.其中一组细胞骨架蛋白及细胞骨架相关蛋白同时发生改变,与牙周韧带细胞成骨分化早期细胞骨架重组、有丝分裂和细胞迁移等过程紧密相关.结论 建立了人牙周韧带细胞成骨分化早期的差异蛋白质组图谱,为牙周韧带细胞成骨分化的蛋白调控机制进一步研究提供了实验依据.
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组织块法培养原代人PDLCs技术的新探讨
目的 探讨组织块法培养原代人PDLCs生长情况和成功率,以及提高组织块法培养原代人PDLCs成功率的方法.方法 采用组织块法培养原代人PDLCs.免疫组化ABC法进行波形丝蛋白(VIM)和细胞角蛋白(CK)的免疫组化染色,进行细胞来源鉴定.倒置显微镜下进行形态学观察,取第4代人PDLCs用MTT法绘制生长曲线.计算细胞培养成功率.结果 组织块法培养原代人PDLCs成功率52.4%.波形丝蛋白染色阳性,细胞角蛋白染色阴性.细胞大多呈长梭形.胞体丰满,伸展良好,核仁清晰,细胞排列均匀,呈漩涡状,火焰状.生长曲线示细胞第3天开始进入对数生长期.结论 本实验组织块法培养原代人PDLCs的成功率为52.4%.为人PDLCs作为种子细胞的牙周组织工程的研究,提供了实验基础和理论依据.
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人牙周韧带细胞膜片的体外实验研究
目的 观察体外培养人牙周韧带细胞(hPDLCs)的成骨、成脂能力；构建hPDLCs膜片并鉴定膜片细胞外基质的主要结构蛋白.方法 通过酶联组织块法分离并纯化培养hPDLCs;免疫细胞化学法鉴定hPDLCs来源及干细胞标志物STRO-1表达情况;取第2～4代细胞分别用成骨诱导培养基和成脂诱导培养基培养,茜素红及油红O染色检测hPDLCs的成骨、成脂能力;制备成熟的hPDLCs膜片,苏木素-伊红(HE)及免疫组织化学染色法鉴定膜片细胞外基质主要结构蛋白Ⅰ型胶原、层黏蛋白及纤连蛋白的表达情况.结果 经原代培养的hPDLCs抗波形蛋白染色阳性,干细胞标志物STRO-1染色阳性,证实hPDLCs来源于间充质并具有干细胞潜在分化能力；hPDLCs在诱导成骨、成脂分化培养14～16 d后,茜素红及油红O染色结果阳性提示hPDLCs具有良好的成骨及成脂分化能力;HE染色及免疫化学染色发现hPDLCs膜片高表达细胞外基质主要结构蛋白Ⅰ型胶原、层黏蛋白及纤连蛋白.结论 本研究从细胞分离培养,来源鉴定、多向分化潜能诱导及细胞膜片技术等方面证实PDLCs中存在成体干细胞,提示hPDLCs膜片能为牙周组织再生种子细胞提供新来源,可进一步深入研究.
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人牙周韧带细胞-聚羟基乙酸支架复合体修复牙周组织缺损
背景：近年来，组织工程技术作为新型组织再生模式，为牙周缺损修复提供了新的思路和方法。目的：观察人牙周韧带细胞-聚羟基乙酸支架复合体修复牙周组织缺损的效果。方法：采用多次沉淀法将第4代人牙周韧带细胞以1.5×109 L-1的浓度接种于聚羟基乙酸支架上，制备细胞-支架复合体。取10只杂种犬，建立牙周组织缺损模型后随机分组，实验组牙周组织缺损处植入细胞-支架复合体，对照组牙周组织缺损处直接直接龈瓣冠向复位缝合。术后4周内，检测两组牙周组织缺损处胶原组织、新生毛细血管、新生牙骨质、新生牙槽骨与新生牙周膜组织；术后8周，进行牙周组织缺损处苏木精-伊红染色。结果与结论：实验组术后1，2，3，4周的胶原含量、新生毛细血管数量、新生牙骨质、新生牙槽骨、新生牙周膜组织均显著多于对照组(P<0.05)。术后8周，实验组新生牙槽骨的结缔组织面存在较多血管排列，牙槽骨与牙周膜的链接呈锯齿状，可看见薄层牙骨质沉积；对照组仅见新生牙槽骨和牙骨质形成，部分位于切迹以下。结果表明，人牙周韧带细胞-聚羟基乙酸支架复合体可促进牙周组织再生。
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3种根尖倒充填材料对体外人牙周韧带细胞创伤模型创面愈合的影响
目的:利用牙周细胞体外创伤模型,探讨 MTA、银汞合金和 IRM 对人牙周韧带细胞生长的影响.方法:在培养皿中形成人牙周韧带细胞的融合培养物,以机械方法去除宽3mm的细胞层条带形成体外创伤模型.在受损培养物中,分别加入以上3种根尖倒允填材料的浸提液,并以含有10%胎牛血清的培养液作为阳性对照组,含有0.1%胎牛血清的培养液作为阴性对照组.继续培养2、6、9d,对每个时间点细胞增殖能力和对创面的覆盖能力进行检测,应用SPSS11.5软件包对数据进行统计学分析.结果:第2天时,细胞增殖能力为MTA组＞银汞合金组≈IRM组;第6天和第9天时,细胞覆盖能力为MTA组＞银汞合金组＞IRM组(P＜0.05).结论:3种材料中,MTA的生物相容性好,其次是银汞合会,而IRM差.
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四环素和多西环素对人牙周韧带细胞生物学活性的影响
目的探讨四环素及多西环素对体外培养的人牙周韧带成纤维细胞(HPDLCs)的生物学作用.方法将不同浓度的2种药物(1、5、20、100、500、2500 μg/ml)加入体外培养的HPDLCs中,共孵育2d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用MTT法、考马司亮蓝法及3H-TdR掺人法,分别检测其对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响.结果在1～100 μg/ml的浓度范围内,2种药物对细胞形态无影响.在20～100μg/ml的浓度范围内,四环素显著促进HPDLCs的增殖及生物合成(P＜0.01),而多西环素只在20μg/ml时,能显著促进细胞DNA的合成(P＜0.01).当2种药物的浓度增至2500μg/ml时,不仅使细胞的镜下形态发生明显改变,而且严重抑制细胞的生物学活性.结论在合适的浓度范围内,四环素能显著促进HPDLCs的增殖及生物合成,多西环素的促进作用不明显,而浓度过高时两者均具有细胞毒性.
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人牙周韧带细胞与β-磷酸三钙多孔生物陶瓷三维培养的实验研究
目的:通过将人牙周韧带细胞(human periodontal ligament cells, PDLCs)接种到三维多孔β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)陶瓷支架材料上,探讨以β-TCP为牙周组织工程支架材料的可能性.方法:取新鲜拔除的健康第一前磨牙牙周膜,用组织块培养法培养PDLCs.β-TCP多孔陶瓷加工成片状,作为细胞支架,将4-7代PDLCs与β-TCP进行体外三维培养,2周后观察细胞生长状况.结果:PDLCs在β-TCP支架材料上附着、增殖并复层生长.结论:β-TCP具有良好的生物相容性,有望成为牙周组织工程的支架材料.
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SGBG/PHBV构建牙周组织工程支架的初步研究
目的 研究溶胶-凝胶生物活性玻璃(SGBG)/聚羟基烷酸酯(PHBV)与人牙周韧带细胞(PDLCs)的生物相容性,为牙周组织工程支架的选择提供依据.方法 通过体外细胞培养实验,包括采用MTT比色分析法的浸提液实验,测定材料对人牙周韧带细胞有无毒性;及人牙周韧带细胞与SGBG/PHBV体外三维培养的直接接触法,通过扫描电镜,上清液羟脯氨酸含量的测定,检测材料对细胞生长形态及分泌功能的影响.结果 SGBG/PHBV对人牙周韧带细胞无毒性,细胞在SGBG/PHBV三维支架上贴附及生长良好,实验组上清液羟脯氨酸含量测定值与对照组差异有显著性,材料不影响细胞的分泌功能,同时支架材料的三维结构更能促进细胞的分泌功能.结论 SGBG/PHBV作为支架材料,有良好的生物相容性,有望应用于牙周组织缺损的组织工程修复.
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SGBG/PHBV与人牙周膜细胞的生物相容性
[目的]研究溶胶-凝胶生物活性玻璃(SGBG)/聚羟基丁酸戊酸共聚酯(PHBV)与人牙周韧带细胞(PDLC)的生物相容性,为牙周组织工程支架的选择提供依据.[方法]采用组织块法培养原代人PDLC,分为浸提液组和对照组接种于96孔板,每组9孔,分别加入浓度为100％、75％、50％、25％、0％的浸提液,48 h后采用MTT比色分析法的浸提液实验对材料进行毒性评级.采用人PDLC与SGBG/PHBV体外三维培养,扫描电镜下观察细胞形态及生长情况.实验组采用SGBG/PHBV复合培养,对照组采用普通培养基培养,培养12、24、48 h后,每组取27个样本定量检测上清液碱性磷酸酶(ALP)含量.[结果]浸提液培养结果显示:毒性评级为1级和0级.扫描电镜示人PDLC在三维支架上贴附生长均良好.实验组上清液ALP含量高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]SGBG/PHBV对人PDLC无毒性,SGBG/PHBV和人PDLC三维培养,表现出良好的生物相容性,有望应用于进一步的牙周组织工程的研究.
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血小板源性生长因子对人牙周韧带细胞在壳聚糖-磷酸三钙支架材料上附着和增殖的影响
目的:研究血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)对人牙周韧带细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)在壳聚糖-磷酸三钙(chitosan/tricalcium phosphate,CTCP)支架材料上附着和增殖的影响.方法:将一定体积的CTCP支架材料置96孔培养板内,取第5代hPDLC接种在材料表面.实验组加入含PDGF-BB的DMEM培养液,使得PDGF-BB终浓度分别为1 ng/mL、10 ng/mL和100 ng/mL;对照组仅加入DMEM培养液.孵育24 h及72 h后分别对材料上的细胞计数;72 h后对标本行扫描电镜观察.结果:与对照组相比,各浓度PDGF-BB组培养24 h后均可促进hPDLC在CTCP支架材料上的附着,呈浓度依赖关系,差异具有统计学意义(P＜0.05),其中100 ng/mL为有效浓度;同时培养72 h后各浓度PDGF-BB组均能促进hPDLC在CTCP支架材料上的增殖,差异具有统计学意义(P＜0.05);扫描电镜观察发现PDGF-BB组较对照组hPDLC在材料上附着数量增加,伸展更充分.结论:hPDLC在CTCP支架材料上的附着和增殖可被PDGF-BB所增强.
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黄芩苷对人牙周韧带细胞超微结构的影响
目的:观察黄芩苷对人牙周韧带细胞超微结构的影响.方法:10 ng/mL的黄芩苷孵育人牙周韧带细胞5 d,采用透射电镜观察人牙周韧带细胞超微结构的变化.结果:与对照组比较,用药组细胞的内质网、线粒体等明显增多.结论:黄芩苷能促进细胞的代谢和蛋白质的合成,与细胞增殖实验和总蛋白测定结果一致.
