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人参皂甙Rgl组合对人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中核基质构型与蛋白质组成的影响
目的 研究中药有效成分人参皂甙Rgl、肉桂酸CINN及丹参酮TanⅡ A的组合(简称RCT),诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中,细胞核基质构型与蛋白质组成的变化.方法 应用流式细胞仪检测细胞周期变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,以选择性抽提整装光镜与电镜技术及蛋白质组学技术分析观察处理前后MG-63细胞核基质构型与蛋白质组成的变化.结果 生长曲线显示,RCT处理后MG-63细胞的增殖受到明显抑制,增殖抑制率在第7天达到72.37%,细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞.MG-63细胞核基质为典型的肿瘤细胞恶性表型,在RCT处理后发生了向正常细胞转变的恢复性变化.RCT处理后的细胞中多种核基质功能蛋白的表达发生了变化.结论 RCT能显著抑制体外培养MG-63细胞的增殖活动,将细胞周期阻滞于G0/G1期,诱导核基质构型发生了显著的恢复性变化,并改变核基质蛋白的组成,对MG-63细胞具有显著的分化诱导作用.
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Prohibitin在姜黄素诱导人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中的调控机制
目的 探讨姜黄素(curcumin)诱导成骨肉瘤细胞凋亡前后,Prohibitin(PHB)蛋白的定位与表达变化,及PHB与凋亡相关基因产物的共定位关系.方法 选择性抽提经姜黄素诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白,以蛋白质组学、免疫印迹法和激光扫描共焦显微技术对PHB在核基质中存在、分布及其与凋亡相关基因产物在MG-63细胞中的共定位关系进行了研究.结果 双向凝胶电泳、质谱鉴定和免疫印迹法结果显示,PHB存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,细胞凋亡后在细胞核基质蛋白中表达下调.免疫荧光显微镜观察显示,PHB定位于MG-63细胞核基质纤维上,经姜黄素处理后出现分布位置与表达水平的变化.激光扫描共焦显微镜观察结果显示,PHB在MG-63细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2、Fas、P53、c-Myc和Rb等基因产物具有共定位关系,且共定位区域发生了变化.结论 PHB是一种核基质结合蛋白;PHB在MG-63细胞凋亡过程中的表达与分布变化,及其与细胞凋亡相关基因的共定位关系,对MG-63细胞凋亡具有重要影响.
关键词： Prohibitin 核基质 人成骨肉瘤MG-63细胞 姜黄素 免疫印迹法 -
人参皂甙Rg1、肉桂酸与丹参酮ⅡA组合对体外人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响
目的 研究中药有效成分人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮ⅡA组合(RCT)对人成骨肉瘤MG-63细胞的形态与超微结构改变和终末分化的影响,鉴定其对人成骨肉瘤细胞终末分化的诱导作用. 方法 以中药有效成分组合(33mg/L人参皂甙Rg1+2mmol/L肉桂酸+0.3mg/L丹参酮ⅡA)处理MG-63细胞7d,对照组与处理组样本各3次重复,免疫细胞化学检测及光镜与电镜观察系统研究RCT组合对MG-63细胞的细胞生物学效应.环六亚甲基双乙酰胺(HMBA)处理MG-63细胞作为分化诱导效果的阳性对照. 结果 免疫细胞化学检测显示,成骨肉瘤细胞终末分化指标Ⅰ型胶原、骨黏素、骨钙蛋白的表达呈强阳性,并观察到钙化糖原颗粒增多与典型骨结节的形成;光镜与电镜观察结果显示,处理后的MG-63细胞产生了细胞形态规则,大小一致,细胞铺展体积增大,核质比例减小,核内核仁数目减少,细胞器丰富发达等趋向正常细胞特征的显著改变. 结论 RCT组合能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并促进终末分化标志物的表达,从而对人成骨肉瘤MG-63细胞的终末分化具有显著诱导作用.
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17β-雌二醇和孕酮对人成骨细胞胰岛素受体底物家族的作用
目的观察17β-雌二醇和孕酮对人成骨细胞和人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物家族(insulin receptor substrate IRS)表达的影响.探讨雌、孕激素对骨的作用机制.方法从正常骨折病人骨组织中分离正常人成骨细胞,经纯化和培养后,用Van Gieson行Ⅰ型胶原染色、钙钴法行碱性磷酸酶染色、茜素红行钙化结节染色进行成骨细胞鉴定.用半定量RT-PCR检测细胞IRS-1、-2、-3 mRNA表达量.结果分离和培养的细胞具有正常人成骨细胞的形态,能分泌Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶并形成钙化结节.17β-雌二醇和/或孕酮均不影响人成骨细胞和MG-63细胞IRS-1mRNA的表达(P＞0.05),可诱导人成骨细胞和MG-63细胞IRS-2 mRNA的表达上调(P＜0.05),IRS-3 mRNA的表达下调(P＜0.05).二者联合干预时作用明显加强(P＜0.01).结论 17β-雌二醇和孕酮均不影响IRS-1 mRNA的表达,但可使人成骨细胞和MC-63细胞IRS-2 mRNA的表达上调,IRS-3mRNA的表达下调,二者联合干预具有正性协同效应.不同的IRS家族成员对同一细胞具有效应的多样性.
关键词： 成骨细胞 人成骨肉瘤MG-63细胞 胰岛素受体底物 17β-雌二醇 孕酮 -
丹参酮ⅡA对人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响
目的:观察中药有效成分丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对人成骨肉瘤MG-63细胞形态与超微结构和相关终末分化指标的影响,以鉴定其对肿瘤细胞终末分化的诱导作用.方法:0.5μg/mL丹参酮ⅡA处理MG-63细胞,光镜、电镜观察和免疫细胞化学检测系统研究MG-63细胞处理前后细胞形态、超微结构变化和成骨细胞相关终末分化蛋白的表达变化.结果:光镜与电镜观察结果显示经Tan ⅡA处理细胞产生了核质比例减小、异染色质减少、常染色质增多、细胞器丰富发达、细胞表面微绒毛减少等显著变化;免疫细胞化学检测显示处理后MG-63细胞I型胶原蛋白、骨粘素和骨钙蛋白的表达呈阳性,并观察到钙化糖原颗粒增多和典型骨结节的形成.结论:丹参酮ⅡA能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并促进与成骨细胞相关的终末分化指标的表达变化,从而对人成骨肉瘤细胞的终末分化具有明显的诱导作用.
关键词： 丹参酮HA 诱导分化 人成骨肉瘤MG-63细胞 细胞形态与超微结构 终末分化指标 -
姜黄素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制和凋亡相关基因表达的影响
目的:探讨姜黄素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制及凋亡相关基因表达的影响.方法:用姜黄素处理MG-63细胞,细胞计数法检测细胞增殖抑制的效果;荧光染色观察细胞的凋亡;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期时相分析;免疫细胞化学法和western blotting免疫法检测细胞凋亡相关基因的表达水平.结果:随着姜黄素浓度的增加及其作用时间延长,对细胞的增殖抑制作用增强,高抑制率可达89.07%;光镜下可观察到细胞发生染色质浓缩,细胞核凝聚和碎裂等典型的凋亡形态学改变;FCM检测结果显示细胞经姜黄素处理后出现明显的凋亡峰;免疫反应结果显示,凋亡相关基因bcl-2和P53表达水平降低,而bax和Fas表达水平升高.结论:姜黄素能显著抑制MG-63细胞增殖并可有效诱导其凋亡,其作用机制可能与bcl-2和bax二者的比值发生变化从而接受了凋亡刺激信号有关.
关键词： 姜黄素 人成骨肉瘤MG-63细胞 细胞凋亡 Bel-2 Bax -
槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞体外增殖与凋亡的影响
目的:观察槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响.方法:不同浓度的槲皮素作用于体外培养的MG-63细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测槲皮素对MG-63细胞增殖的抑制能力,流式细胞术(FCM)检测槲皮素对MG-63细胞凋亡的影响.结果:槲皮素可显著抑制MG-63细胞增殖,具有明显剂量和时间依赖性;槲皮素可明显诱导MG-63细胞凋亡.结论:槲皮素能够抑制MG-63细胞增殖,诱导MG-63细胞凋亡.
关键词： 槲皮素 人成骨肉瘤MG-63细胞 细胞增殖 细胞凋亡 实验研究 -
胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2基因表达的影响
目的观察胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2(IRS-2)基因mRNA表达的影响.方法用胰岛素干预人成骨肉瘤MG-63细胞,半定量RT-PCR检测细胞IRS-2基因mRNA的表达量.结果 10-10mol/L ～10-6mol/L胰岛素上调细胞IRS-2 基因mRNA的表达(P＜0.05),且具有剂量依赖性.胰岛素的调节还存在时效依赖性,10-8mol/L胰岛素干预12h可下调细胞IRS-2基因mRNA的表达(P＜0.05),干预24h～48h上调细胞IRS-2基因mRNA的表达(P＜0.05).结论胰岛素可影响人成骨肉瘤MG-63细胞IRS-2基因mRNA的表达,胰岛素可能对1型糖尿病患者骨质疏松的发生和发展起着重要的作用.
关键词： 胰岛素 胰岛素受体底物-2 人成骨肉瘤MG-63细胞 -
人成骨细胞胰岛素受体底物的表达
目的观察人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞(human osteoblast-like cells HOB)胰岛素受体底物(insulin receptor substrate IRS)的表达.方法半定量RT-PCR检测IRS mRNA表达,免疫共沉淀检测IRS蛋白表达.结果人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞均有IRS-1、-2、-3、-4 mRNA和蛋白质的表达,以IRS-1的表达丰度高, IRS-4表达丰度低.其中IRS mRNA和蛋白质在MG-63细胞中的表达丰度较在正常人成骨细胞中的表达丰度稍高.结论人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞均可表达IRS mRNA和蛋白质.且IRS不同成员在同一细胞中的表达丰度不同.
关键词： 正常人成骨细胞 人成骨肉瘤MG-63细胞 胰岛素受体底物 胰岛素受体 -
机械牵张力对人成骨样细胞糖链影响的初步研究
目的:研究机械牵张力对人成骨肉瘤MG - 63细胞糖蛋白糖谱表达的影响.方法:以Flexcell细胞应力培养系统对人成骨肉瘤MG-63细胞施以形变率为12％,加载时长分别为4、8、12、24h的周期性张应变,利用凝集素芯片技术筛选出糖蛋白糖谱中差异表达的糖蛋白糖链,比较不同加载时长下成骨样细胞表面糖谱的变化.结果:8h加力组表达差异明显,在加力后实验组凝集素Jacalin、LEL、GSL-Ⅰ、DBA、RCA、VVA、ACA的亲和作用增强,而对凝集素WFA、EEL、AAL、LCA、STL的亲和作用减弱,提示在机械牵张力作用下成骨样细胞表面可能出现增多的黏蛋白T/Tn抗原；Ⅰ-抗原；N-乙酰半乳糖胺(包括α1-3链接方式),α及β链接半乳糖结构和减少的岩藻糖α1-2链接半乳糖；核心岩藻糖；N-乙酰葡糖胺结构等.结论:通过凝集素芯片技术研究发现受机械应力刺激后的成骨样细胞表面糖链变化与时间呈相关性,可推测在加载8h后成骨样细胞已具备了某些骨化的早期表现.在加载4h后成骨样细胞便出现对信号转导的重要调节修饰,为研究骨改建信号转导发生机制提供了糖组学理论支持.
关键词： 凝集素芯片 人成骨肉瘤MG-63细胞 机械牵张力 糖蛋白
