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人胎盘CD133+细胞具有高增殖潜能集落形成细胞特性
目的 通过对人胎盘CD133+细胞群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)检测与生物学特性的分析,证明人胎盘存在早期造血干/祖细胞(HSPC). 方法 采用机械法制备人胎盘组织(PT)单细胞悬液,用Histopaque-1007分离出单个核细胞(MNC),经磁式分选(MACS)富集CD133+细胞,培养28 d后观察HPP-CFC集落形成能力,用流式细胞仪(FCM)对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析,实验全程用脐带血(UCB)作平行比较分析. 结果 培养28 d后,PT-CD133+与UCB-CD133+细胞组份分别扩增了266和362倍,前者低于后者(P<0.01);PT-CD133+与UCB-CD133+细胞中HPP-CFC分别为(32.4±11.2)/5×103、(17.7±5.7)/5×103,前者形成的HPP-CFC数量明显高于后者(P<0.01);PT.CD133+、UCB-CD133+细胞培养至28 d时,除UCB-CD133+组的CD133+CD34-亚群比例无明显改变外,CD133+CD34+、CD133-CD34+和CD133+CD34-(PT-CD133+组)亚型均比培养前减少. 结论 人胎盘组织CD133+细胞中存在HPP-CFC,说明胎盘CD133+细胞群中存在早期HSPC.
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CD133阳性/阴性肺癌细胞的分选、鉴定及差异基因的筛选
背景与目的研究表明多种实体肿瘤中存在肿瘤干细胞（cancer stem cells, CSCs），肿瘤干细胞与非肿瘤干细胞的生物学特性存在已有的明显差异，而CD133被认为是肿瘤干细胞的标记物，因此CD133阳性细胞与CD133阴性细胞可能存在明显差异。本研究通过分选人肺腺癌A549细胞中的CD133阳性及CD133阴性细胞，鉴定两组细胞的生物学特性并在人组织标本进行验证，利用基因芯片筛选转移相关差异基因。方法采用磁式分选（mag-netic activated cell sorting, MACS）的方法对人肺腺癌A549中CD133阳性细胞、CD133阴性细胞进行分选，通过无血清条件培养、平板克隆、血清诱导分化及基因芯片等实验，比较两组细胞“sphere”形成、细胞增殖、细胞分化以及差异基因，并在人组织标本进行CD133表达与临床特性的验证分析。结果 CD133阳性细胞能在无血清培养基中悬浮生长并形成“sphere”；其平均克隆形成率（57.1%）明显高于CD133阴性细胞（3.3%）；CD133阳性细胞能被血清诱导分化、表达腺癌标志物CK7；两组细胞中的19个转移基因表达水平相差两倍或以上，差异高达12倍；肺癌组织中CD133阳性细胞主要分布于癌巢周边，数量稀少，其表达与肿瘤组织学分型、分级及临床分期无关。结论 CD133阳性肺腺癌A549细胞具有CSCs特性；两组细胞在转移相关基因的表达存在明显差异，其中CD82可能在CD133阳性细胞的转移机制中起重要作用。
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非小细胞肺癌患者外周血髓样抑制细胞比例及其对CD8+T细胞抑制作用的测定
目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中髓样抑制细胞(MDSCs)的比例及其对CD8+T细胞的抑制作用.方法:密度梯度离心法分离30例NSCLC患者及15例健康对照者外周血单个核细胞(PBMC),流式抗体染色后经流式细胞仪检测MDSCs中CDllb、CD14和CD33的表达;磁珠分选法分离、纯化肿瘤患者外周血中的MDSCs及健康者外周血中的CD8+T细胞,1∶1共培养72小时,用ELISA法测定24、48、72小时细胞培养上清液的INF-γ水平.结果:30例进展期NSCLC患者外周血中MDSCs比例为(25.1±16.8)％,明显高于健康对照组(8.2±3.6)％,两者差异有统计学意义(P＜0.001);未观察到MDSCs比例与患者年龄、性别、分期及病理类型有关(P ＞0.05);ELISA法显示:与CD8+T细胞单独培养组相比,MDSCs与CD8+T细胞组共培养24、48、72小时的培养上清IFN-γ水平由(201.3±14.57) ng/ml逐渐下降为(163.33±7.77) ng/ml、(132.0±6.9) ng/ml和(79.67±7.09) ng/ml,明显降低(P＜0.05).结论:进展期NSCLC患者外周血中MDSCs的比例较健康者明显升高,且对CD8+T细胞有抑制作用,MDSCs增多可能是NSCLC患者发生免疫抑制的重要原因之一.
