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小鼠2-细胞、4-细胞胚胎G1期检测及同步化的研究
目的研究小鼠2-细胞、4-细胞胚胎同步化的方法,并检测其G1期的持续时间.方法先用低温抑制和噻胺酯哒唑阻断的方法分别将小鼠2-细胞和4-细胞胚胎同步化于G1期,然后利用放射自显影技术检测胚胎DNA的合成.结果(1)小鼠2-细胞胚胎G1期的持续时间短于3h.(2)噻胺酯哒唑对胚胎细胞的抑制作用及对胚胎发育的影响有浓度依赖性.(3)小鼠4-细胞胚胎的G1期约3～4h.结论小鼠早期胚胎细胞周期的G1期持续时间都很短,利用噻胺酯哒唑阻断和低温控制的方法能够得到大量同步于G1期的胚胎细胞.
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阿尔茨海默病患者外周血淋巴细胞G1S检验点功能障碍研究
目的 检测G1期向S期转换的特异性阻滞剂雷帕霉素在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者外周血淋巴细胞G1S检验点功能,探索AD新的外周标记物及治疗靶点.方法 选择AD患者50例(AD组),另选择健康体检者50例(对照组),分离外周血淋巴细胞,经植物凝集素(促使细胞进入细胞循环)干预24 h(T24期细胞),再经雷帕霉素干预24 h(T48),流式细胞技术分别检测2组T24、T48细胞周期分布情况.结果 在T24期细胞,AD组与对照组G1期细胞和S期细胞比较,差异无统计学意义[(71.14±5.25)％ vs (71.11±4.94)％,(18.55±3.57)％ vs (18.13±3.53)％,P＞0.05];在T48期细胞,AD组G1期细胞明显低于对照组[(47.70±7.19)％ vs(71.05±4.14)％,P=0.005)],而S期细胞明显高于对照组[(29.12±4.36)％ vs (15.26±3.27)％,P=0.003)].结论 经雷帕霉素处理的AD细胞呈现不明显的G1期向S期的阻滞效应,AD患者外周血淋巴细胞G1S检验点功能障碍,G1S检验点功能障碍有望成为AD新的外周标记物及治疗靶点.
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MML-1细胞G《,1》期阻断对Fas诱导细胞凋亡的抑制作用
目的 分析Fas诱导的B淋巴瘤细胞株MML-1凋亡过程中,PMA阻断MML-1进入细胞周期后细胞凋亡敏感性降低的原因.方法 采用10 nmol/L PMA预处理MML-1细胞24 h,用流式细胞仪检测PMA阻断细胞周期前后50 ng/mL抗Fas抗体诱导的MML-1细胞凋亡率的变化.采用PI-Triton X和active caspase-3/8双染色、Western blotting技术分析PMA处理前后,经抗Fas抗体诱导的MML-1细胞内活化caspase-3/8的表达.通过Western blotting技术检测G1期细胞的凋亡相关蛋白caspase-3/8、Bcl-2、FLIP和Akt的表达.结果 PMA预处理MML-1细胞24 h后,G1期细胞比例显著升高,达93.77%.PMA预处理前,抗Fas抗体诱导6 h后的MML-1细胞凋亡率为56%;经PMA预处理,抗Fas抗体诱导6 h后的MML-1细胞凋亡率为14%.流式细胞术和Western blotting检测发现经PMA预处理,抗Fas抗体诱导后活化caspase-3和caspase-8蛋白的表达受到显著抑制.Westernblotting检测显示G1期细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达上调.结论 将MML-1细胞阻断在G1期能够抑制Fas诱导的细胞凋亡,可能与凋亡抑制分子Bcl-2在G1期的表达上调有关.
