首页 > 文献资料
-
利用四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠的技术方法
目的 介绍四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠技术的操作环节,加快该技术的推广应用.方法 综合分析近几年来国内外在小鼠四倍体胚胎与ES细胞嵌合的研究成果,并结合我们自己的实验结果,分析影响ES小鼠制备的各种因素.结果 四倍体胚胎不能正常发育至妊娠期末,通过四倍体胚胎与胚胎干(ES)细胞的嵌合可以得到完全由ES细胞发育而来的小鼠,即ES小鼠.同核移植小鼠相比,ES小鼠具有正常的形态、生理和神经特征.ES细胞和四倍体胚胎的遗传背景、ES细胞的生长状态、嵌合方法、培养基种类、体外培养环境、移植方法、继母母性等是影响ES小鼠生活力的重要因素.结论 利用四倍体胚胎补偿法可以简便而快速地从遗传修饰的ES细胞获得突变体小鼠,为研究基因功能和构建人类疾病动物模型提供了一条有效途径.
-
四倍体胚胎发育阶段对胚胎干细胞嵌合体小鼠制备的影响
目的 探讨四倍体胚胎发育阶段对胚胎干细胞(ES)嵌合体小鼠制备的影响.方法 通过2-细胞胚胎电融合法制备四倍体胚胎,采用显微注射方法将ES细胞分别注入1-细胞、4-细胞、囊胚3个发育阶段的四倍体胚胎中.所用ES细胞分别为杂交系B6D2F1×129/Sv和近交系C57BL/6J,经胚胎移植和剖腹产以获得ES小鼠.结果 实验表明,2-细胞胚胎电融合率为92.45%,4-细胞胚胎发育率为93.51%,囊胚发育率为90.42%.杂交ES细胞注射四倍体囊胚获得22只ES小鼠,效率显著高于近交系ES细胞以及其他发育阶段的四倍体胚胎,ES小鼠与B6D2F1×129/Sv杂交小鼠毛色一致且具有正常生殖能力.结论 四倍体胚胎的发育阶段显著影响ES小鼠的制备.
-
昆明小鼠四倍体胚胎的制作
目的 介绍一种简单易行的制作四倍体胚胎的方法.方法 取腹腔注射人绒毛膜促性腺激素 (hCG)后37～40h的小鼠2-细胞胚胎,应用电融合方法,制作四倍体胚胎.用CZB培养液对四倍体胚胎进行体外培养.结果 采用交流电((AC)3V/mm、直流电(DC) 140v/mm、脉冲宽度50s、一次脉冲进行融合,融合率为97%,囊胚率为72.7%.结论 电融合方法可以应用于制作四倍体胚胎.
-
蛋白激酶Cα在小鼠孤雌及四倍体胚胎早期发育过程中的分布和作用
为了观察蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα在昆明白小鼠受精卵、孤雌激活和四倍体胚胎早期发育阶段的亚细胞定位和致密化进程中的表达变化,本实验利用免疫荧光化学染色与激光共聚焦显微镜观察相结合的方法,对受精卵、孤雌激活和四倍体胚胎早期发育阶段PKCα的表达进行了定位观察,并利用Western blot对三组胚胎致密化进程中PKCα的表达进行定量分析.结果显示,PKCα在上述三组胚胎发育的2-细胞期至囊胚期均有表达,虽然不同胚胎PKCα的分布在同一发育阶段存在差异,却表现出在各胚胎期主要分布于卵裂球核染色质内,以及在胚胎致密化开始,PKCα在卵裂球连接处发生重新分布的共同特点.此外,三组胚胎PKCα在致密化进程中的表达呈升高趋势,即致密化后的表达高于敛密化前.结果表明,PKCct对胚胎致密化的调节具有重要作用,其在8-细胞/4-细胞期的重新分布是胚胎进入桑椹胚期的必然事件,是胚胎致密化的前提,同时伴随蛋白表达增多.此外,PKCα在囊胚期发生了植入前的第二次重新分布.PKCα在三组胚胎各发育阶段表达情况各不相同,它对小鼠胚胎发育的影响体现在整个早期发育阶段.PKCα在小鼠受精卵早期发育阶段的两次重新分布可能与在致密化开始时启动的细胞黏附事件存在某种必然联系.
