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鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原基因sag10在毕赤酵母中的表达及鉴定
sag基因家族是制备基因工程疫苗重要的候选基因.本研究通过在毕赤酵母Pichia pastoris中表达柔嫩艾美耳球虫Eimeria tenella表面抗原基因sag10,来探讨sag10表达后的生物学活性.本文首先提取柔嫩艾美耳球虫北京株第2代裂殖子总RNA,根据GenBank报道序列(AJ586552)设计引物,应用RT-PCR技术扩增得到鸡球虫表面抗原sag10基因.然后将sag10与真核表达载体pPIC9K连接,构建了pDQ052分泌型真核表达质粒,并转化毕赤酵母GS115,利用G418抗性筛选多拷贝重组菌株,进行优化表达.SDS-PAGE和Western blot检测表达结果,在43 kDa处有明显的免疫印迹条带,表明目的蛋白得到表达,而且能被特异性抗体所识别,说明表达的SAG10蛋白具有生物学活性.
