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白三烯B4受体新亚型BLT2的研究进展
白三烯B4(LTB4)在炎症、免疫系统疾病和变态反应中发挥着重要作用.BLT2作为LTB4受体新亚型,其发现对于深入认识LTB4的作用以及作为相关疾病的新防治靶标意义重大.本文在简单介绍LTB4的基础上着重对BLT2的分子生物学特点、组织分布,以及可能的病理生理意义和药理学作用进行了综述.
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LTB4-BLT2信号通路对小鼠树突状细胞功能的影响
目的 研究外源性白三烯B4(LTB4)刺激条件下对小鼠体外诱导培养的树突状细胞(DCs)趋化功能的作用及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)两种细胞因子表达及分泌量的影响,利用其受体BLT2通路探究其作用机制.方法 体外原代培养小鼠骨髓来源单个核细胞,添加粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)诱导为DCs,磷酸脂多糖(LPS)体外刺激其成熟,分析DCs表面因子的表达；利用小干扰RNA(siRNA)阻断LTB4-BLT2通路后RT-PCR分析BLT2基因水平抑制情况；外源性LTB4刺激阻断通路的细胞,Transwell趋化小室结合噻唑蓝(MTF)法分析对其趋化功能的影响；ELISA检测不同条件对细胞TNF-α、IL-1β分泌量的影响,RT-PCR分析其基因水平表达的影响.结果 体外诱导并刺激成熟的DCs高表达MHC-Ⅱ、CDllc、CD86.利用DNA干扰(RNAi)技术能够成功阻断LTB4-BLT2通路.外源性LTB4分别作用于正常表达和阻断BLT2通路的细胞,可明显促进BLT2正常表达DCs的趋化(P＜0.05),且与剂量成正比.阻断通路的细胞趋化作用明显被抑制甚至消失(P＜0.05)；阻断通路的DCs在外源性LTB4刺激下,细胞TNF-α、IL-1β两种因子分泌量较之对照组明显降低(P＜0.05),同时,这两种细胞因子在基因水平上的表达也明显下调.结论 LTB4刺激的DCs,其BLT2通路明显介入其趋化,同时,DCs分泌细胞因子的功能也与LTB4-BLT2通路相关.抑制BLT2基因表达,DCs的趋化移行作用和致炎因子的分泌功能均受到抑制,深入了解其机制可能为研究炎症有关药物提供新靶点.
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白三烯B4受体对类风湿关节炎的免疫调节作用
目的:白三烯B4(LTB4)受体包括BLT1和BLT2两个亚型,利用各自的特异性拮抗剂U-75302、LY255283,通过体外实验分析LTB4受体在炎症免疫反应中介导的作用.方法:①以U-75302和LY255283分别阻断BLT1和BLT2,用3H-TdR掺入法检测大鼠滑膜细胞的增殖情况.②流式细胞术检测U-75302或LYY255283对大鼠脾CD4+细胞中INF-γ和IL-4表达的影响,分析Th1、Th2细胞的百分率.结果:①U-75302仅在浓度为10 μmol/L时方可检测到对滑膜细胞增殖的明显抑制作用(P<0.05),而LY255283在10 mmol/L～10 μmol/L范围内对滑膜细胞均有明显的抑制作用(p<0.05).②流式细胞术分析结果表明,当U-75302或LY255283达到10 μmol/L时,可明显升高Th2细胞的百分率,而对Th1细胞的百分率影响不明显.结论:BLT1和(或)BLT2介入了大鼠滑膜细胞增殖、Th1/Th2淋巴细胞百分率变化,对于类风湿关节炎(rheumatoid anlmtis,RA)等炎症疾病的防治而言,BLT1、BLT2可能具有重要的药物靶点意义.
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BLT2拮抗剂的体外抗肿瘤效应
目的:探讨白三烯B4受体BLT2拮抗剂LY255283对培养肿瘤细胞增殖的抑制作用.方法:RT-PCR法检测9种人源肿瘤细胞(SMMC7721、A549、Bel7402、BGC823、Eca109、HeLa、HL60、MCF7和Pc3细胞)中BLT2的表达情况；MTT法分析LY255283对上述体外培养肿瘤细胞的增殖抑制作用；流式细胞术及荧光显微镜分析LY255283对MCF7细胞凋亡的影响.结果:9种肿瘤细胞均检测到BLT2 mRNA的表达；LY255283明显抑制上述不同肿瘤细胞的增殖,其IC50值分别为0.21、11.17、1.28、5.9、7.9、1.59、0.14、1.25和31.28μmol/L；在1.0和10.0μmol/L两个作用浓度,LY255283诱导MCF7细胞凋亡的发生率分别为20.47％和37.47％,均明显高于空白对照组(8.66％)和DMSO溶剂对照组(11.71％)(P均＜0.01).结论:BLT2在9种人源肿瘤细胞均有表达,其特异拮抗剂LY255283具有抑制肿瘤细胞增殖效应,诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤的机制一.
