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DAB染色中的两个问题及对策
免疫组化技术在组织学研究和病理诊断尤其是肿瘤鉴别诊断中起着重要作用,在蛋白抗原的细胞准确定位上是其他蛋白检测方法无法相比的.然而,要做好一张漂亮的染色切片,也不是十分容易的事.下面我将工作中发现的问题以及解决方法列出,以供参考.1 DAB染色后切片呈阴性结果1.1原因①抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误.另外,不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果,抗原抗体反应有前带和后带效应,必须摸索佳浓度.②抗原修复不全,对于甲醛固定的组织必须进行充分的抗原修复才能打开抗原表位,与抗体结合;建议高压修复6 min,柠檬酸.③组织切片本身抗原含量低.④血清封闭时间过长.⑤DAB孵育时间过短.⑥细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应.⑦开始做免疫组化,一定要首先做阳性对照片,以排除抗体外的问题.
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基于HRP-DAB信号放大系统的压电石英晶体DNA传感器微阵列检测表皮葡萄球菌的研究
目的 在已构建的压电压电石英晶体DNA传感器检测系统中引入HRP-DAB生物信号放大系统,提高传感器的检测灵敏度,并基于该系统建立一种表皮葡萄球菌快速检测方法 .方法 采用自组装技术在压电石英晶体DNA传感器上固定针对表皮葡萄球菌的寡核苷酸探针,将掺入生物素(biotin)-dUTP的表皮葡萄球菌靶DNA与之进行杂交反应,加入HRP-链亲和素(streptavidin)、DAB工作液,观察反应频率变化;对35份表皮葡萄球菌感染的临床标本进行检测,并与传统培养法进行比较.结果 该压电石英晶体DNA传感器微阵列检测表皮葡萄球菌的灵敏度为95.5%,特异度为84.6%,正确诊断指数为0.801,检出限为2×102CFU/ml,与血培养法差异无统计学意义(P＞0.05).结论 基于HRP-DAB信号放大系统的压电石英晶体DNA传感器微阵列,有效的提高了压电石英晶体传感器检测的灵敏度,可用于临床病原菌感染的快速检测,具有较高的临床推广价值.
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免疫组化染色中剩余DAB的处理方法
免疫组化技术是一项基于对过氧化物酶检测的技术,其机制为利用过氧化物酶催化DAB(3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐)产生不溶于水的棕色物质[1],达到显色的目的.再通过显微镜观察或图像分析系统分析该棕色物质的光密度值,定量判断被检测成分的含量[2].DAB属于联苯胺类化合物,联苯胺类化合物能通过多种途径进入人体,对人体也具有多方面的毒性作用,包括免疫毒性[3]、生殖毒性[4]、遗传毒性[5]以及致癌作用[6].此外,DAB对环境的危害也是相当大的.而在做免疫组化时,为了达到比较准确的实验效果,DAB的用量通常是过量的.这样对DAB的处理将变的十分必要.本文旨在介绍几种处理DAB的方法,以及本科室采用的处理方法.
