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粘质沙雷菌毒性噬菌体PS4的生物学特性及其在小鼠血清中的杀菌作用研究
目的 研究粘质沙雷菌毒性噬菌体PS4的生物学特性及其在小鼠血清中的抗菌活性.方法 观察PS4的噬菌斑及电镜下形态;测定PS4的噬菌谱、生长曲线及其理化稳定性,PS4在营养肉汤培养基、新鲜小鼠血清和灭活小鼠血清中的杀菌作用,以及小鼠血清中影响PS4杀菌能力影响因素.结果 PS4为长尾型噬菌体,在以粘质沙雷菌临床株S4为指示菌时,PS4可形成直径为1～1.5 mm完全透明噬菌斑,其感染S4的潜伏期为10 min,暴发量约为100 PFU/cell,且S4对PS4的抗性突变率仅为10-7.PS4在pH 5～10的环境中具有较好的稳定性,在50℃的环境中仍能长时间保持活力.PS4在新鲜未灭活血清中对S4不具杀菌能力,但在56℃热灭活30 min的鼠血清中以及在营养肉汤中的杀菌率均达99.99％,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PS4具有一定的酸碱稳定性和热稳定性,有望用于医院环境“消毒”,以减少多重耐药粘质沙雷菌所致的院内感染的发生.但因其杀菌作用受血清中不耐热成分的严重干扰,故不能用于治疗由S4引起的小鼠全身感染.
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血清灭活对小鼠淋巴瘤试验结果的影响
目的 探索小鼠淋巴瘤胸腺激酶(tk)位点基因突变试验中血清灭活对结果的影响.方法 取对数生长期的小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y3.7.2c-tk+/-)设立阴性对照组和阳性对照组,阴性对照组加入100 μL DMSO,阳性对照组加入100 μL 10μg/mL 4-硝基喹啉(4-NQO)诱导突变,测定细胞悬浮增长率(SG)、相对悬浮增长率(RSG)、平板效率(PE)、相对存活率(RS)和相对总生长率(RTG)等指标.根据血清灭活与否和选择突变剂三氟胸苷(TFT)的含量,在筛选突变集落过程中,将阴性对照组和阳性对照组各分为:灭活组、未灭活+1.5倍TFT组、未灭活组,测定突变频率(MF),对试验结果进行评价.结果 阴性对照组SG在8～32,细胞倍增速度符合试验要求;PE在65％～120％,符合试验成立条件.阳性对照的灭活组、未灭活+1.5倍TFT组、未灭活组中MF均比阴性对照组至少增加300×10-6且小克隆突变频率至少占40％,符合试验要求.阴性对照灭活组的MF数值在标准范围内,未灭活组的MF数值明显高于灭活组,超过标准数值范围,且96孔板中的大小克隆不易区分;阴性对照未灭活+1.5倍TFT组使得MF数值在标准范围内,但远高于灭活组.结论 在小鼠淋巴瘤试验中,测定MF的平板一定要用灭活的血清,未灭活血清可能通过抵消TFT作用对结果产生很大影响.
关键词： 小鼠淋巴瘤细胞 胸腺激酶(tk)基因突变 热灭活血清 突变频率
