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甲型H1N1流感病毒基因特征及耐药性研究
目的 研究甲型H1N1流感病毒的基因特征和变化规律,为流感疫苗评价提供依据. 方法 选取2009年6月-2013年4月本院分离出的15株甲型H1N1病毒分离株,提取病毒RNA进行反转录.采用PCR方法扩增15株甲型H1N1流感病毒HA和NA全基因并进行测序分析.利用软件Bioedit和MEGA软件对序列进行拼接,绘制种系发生树,采用邻位相临法构建进化树. 结果 15株甲型H1N1流感病毒均为低致病性病毒,对神经氨酸酶抑制剂敏感,对金刚烷胺类呈耐药性.实验毒株HA基因序列与国内和国外毒株同源性为99.1％～99.7％.该地区流感毒株抗原变异程度较大,其中毒株HA发生14个氨基酸点位改变,分别为:A215E,D127E,E235K,E374K,G170E,H138R,L161I,I321V,L191I,P83S,R45K,S185T,S203T和V234I.其中第83位和第321位与国内代表株相同,但是与国外代表株不同.NA发生15个氨基酸点位改变,分别为A20V,N44S,V83M,V106I,E128G,H144Y,I188T,V241I,S247N,N248D,S334N,N369K,N449K,D451G和G454S.其中所有毒株均发生V106I和S247N的变化. 结论 通过对HA和NA基因序列对比分析,该地区流感疫苗对当地居民有保护作用,但是毒株与疫苗株间发生相对抗原漂移,需要进一步观察毒株变异情况.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 基因序列分析 疫苗评价 -
HLA-A*0201/Kb及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用
目的:为了用HLA-A2.1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A*0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞.方法:采用基因共转染的方法,将HLA-A*0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、流式细胞术(FCM)和Western blot检测了HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和提呈.结果:RT-PCR、FCM和Western blot检测到HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MACE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制.结论:MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价.
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戊型肝炎病毒疫苗的研发和评价
由戊型肝炎病毒（ Hepatitis E virus， HEV）导致的疾病日渐引起人们的关注。中国目前已经上市的HEV疫苗为万泰沧海生物技术公司（ INNOVAX ）研发的大肠杆菌表达的 I 型中国分离株ORF2 p239重组疫苗HEV 239（ Hecolin ?），它能形成病毒样颗粒从而产生更好的免疫原性。该疫苗在HEV高危人群和高流行地区的使用将对戊型肝炎的流行起到积极的防控作用。回顾了HEV疫苗研究的历史过程，并探讨了目前HEV疫苗评价方法面临的问题及研究思路。
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疫苗评价中有关风险效益分析的思考
疫苗评价的原则是安全、有效,安全是第一位,有效是第二位的.评价中需分析能够接受疫苗使用带来的风险程度和疫苗接种者的获益程度或对整体流行病学意义的获益程度.本文将站在疫苗评价者的角度,讨论疫苗审评中所关注的风险效益分析,并以多年来总结的实例阐述疫苗研发中需考虑的重点问题.
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百日咳小鼠呼吸道感染模型的建立与应用
目的 模拟自然感染方式建立百日咳小鼠模型,并初步应用于疫苗评价.方法 通过对小鼠品系、周龄,感染用菌株、菌液浊度,感染时间等进行比较,确定动物模型建立的相关参数.然后借助该模型比较全细胞百日咳疫苗和无细胞百日咳疫苗免疫后的小鼠肺部百日咳杆菌的清除情况.程序为第0、2、4周免疫,第6周进行呼吸道感染,感染后2 h、3 d、7 d、14 d、21 d取样,对小鼠肺部菌落进行计数.结果 在菌液浊度至少为109 CFU/mL时,用Tohama I株对4～10周龄BALB/c小鼠雾化感染30 min,小鼠肺部百日咳杆菌分离培养的阳性率可达100％.用于疫苗评价后发现,免疫全细胞百日咳疫苗的小鼠在感染后7d检测不到肺内的百日咳杆菌,而免疫无细胞百日咳疫苗的小鼠在感染后21 d还可分离出少量百日咳杆菌.结论 通过动物发病、肺部细菌分离培养和感染曲线等对动物模型进行分析,证明通过呼吸道感染途径可成功建立百日咳小鼠模型,并且该模型可应用于百日咳疫苗的评价,为百日咳疫苗的有效性评价奠定重要基础.
