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肺炎支原体OsmC蛋白的原核表达及活性分析
目的 表达肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)渗透压诱导蛋白C(OsmC)并测定其活性. 方法 在Mp中找出编码OsmC蛋白的基因,根据Mp OsmC基因序列设计特定引物,PCR扩增OsmC基因.利用EcoRI和XhoI对其进行双酶切,然后连接到表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a MpOsmC,转化大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,采用镍柱亲和层析对重组OsmC蛋白进行纯化,利用氧化铁二甲酚橙试剂(FOX)测定OsmC蛋白的活性. 结果 肺炎支原体Mpn625基因编码OsmC蛋白.PCR扩增OsmC基因片段大小为426 bp,连接到原核表达载体pET28a得到重组质粒pET28a MpOsmC.重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达分子质量单位为19.4 ku的重组Mp OsmC蛋白,与理论值相符.通过亲和层析,得到高纯度的目的蛋白.FOX试剂法测定Mp OsmC具有分解H2O2活性. 结论 重组Mp OsmC蛋白具有氧化酶活性,为探讨肺炎支原体的抗氧化机制提供了理论依据.
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肺炎支原体渗透压诱导蛋白C的分子生物克隆及生物活性分析
目的:用生物克隆的方法表达肺炎支原体(Mycoplasmsapneamoniae,Mp)渗透压诱导蛋白C(Osmotically inducible protein C,OsmC)并测定其生物活性活性.方法:根据Mp的OsmC基因序列设计特定引物,PCR扩增OsmC基因.通过构建重组质粒pET28a-MpOsmC,并转化入大肠埃希菌BL21(DE3),来诱导目的蛋白表达.我们采用镍柱亲和层析法对OsmC蛋白进行纯化,再用氧化铁二甲酚橙试剂(FOX)测定OsmC蛋白的活性.结果:我们用生物克隆的方法得到Mp的OsmC基因片段,并成功构建重组质粒pET28a-MpOsmC.重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)后经过表达我们得到重组Mp OsmC蛋白,再经亲和层析得到高纯度的目的蛋白,且具有分解H2O2的活性.结论:重组Mp OsmC蛋白具有过氧化物酶的活性,为研究肺炎支原体的抗氧化机制提供了理论依据.
