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沙眼衣原体包涵体膜蛋白文献资料
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沙眼衣原体包涵体膜蛋白CT813真核表达载体的构建及表达
目的 构建沙眼衣原体包涵体膜蛋白CT813真核表达载体并观察其在Hela细胞中的表达,为研究其与宿主间的相互作用奠定基础. 方法 克隆CT813基因,分别对CT813与pcDNA3.1/Myc-HisA空质粒进行双酶切,T4连接酶进行连接,然后进行菌落PCR、酶切及测序鉴定;将构建的重组质粒pcDNA3.1/Myc-HisA CT813转染Hela细胞后采用Western blot与间接免疫荧光法检测目的蛋白表达. 结果 PCR显示,扩增的目的基因片段约795 bp,与预期相符;经Not Ⅰ与kpn Ⅰ双酶切鉴定重组质粒构建正确,测定其序列与NCBI数据库完全一致;Western blot显示重组质粒转化Hela表达的CT813融合蛋白分子质量单位为29.4 kd左右;间接免疫荧光法检测该蛋白位于细胞胞浆中,是衣原体分泌性蛋白. 结论 成功构建了PcDNA3.1/Myc-His A-CT813真核表达载体并表达了沙眼衣原体包涵体膜蛋白CT813,对研究其生物学功能及与宿主配体间的相互作用具有重要意义.
