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AP核酸内切酶文献资料
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刚地弓形虫ME49株AP核酸内切酶的原核表达及其多克隆抗体的制备
目的 原核表达、纯化刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)ME49株AP核酸内切酶,并制备多克隆抗体. 方法 采用PCR方法扩增出刚地弓形虫ME49株DNA TGME49-216600 (681bp)基因.将该片段分别插入到pET-28a和pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pET-28a-TGME49-216600和pGEX-4T-1-TGME49-216600并测序,转人大肠埃希菌BL21-CodonPlus后用IPTG诱导表达重组蛋白质.用His标签重组蛋白质免疫家兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测抗体效价;采用Western blot方法分析抗体特异性. 结果 SDS-PAGE分析表达的His标签重组蛋白质分子质量单位约为35 ku,GST标签重组蛋白质分子质量单位约为55 ku.间接ELISA方法检测制备的兔抗His标签重组蛋白抗体效价＞1∶16 000,Western blot方法验证显示该抗体能识别天然AP核酸内切酶. 结论 成功构建了TGME49-216600的表达载体,制备的多克隆抗体具有特异性,为刚地弓形虫ME49株AP核酸内切酶功能的研究奠定了基础.
