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泡球蚴体外培养方法的改进及培养产物的初步鉴定
目的 对泡球蚴体外培养模型进行改进,并对培养产物进行初步鉴定.方法 培养肝癌细胞(Bel7404),留取细胞上清液.取泡球蚴组织,用含肝癌细胞培养上清的DMEM完全培养基于37 ℃ 5% CO2培养箱中培养27 d.实验期间对囊泡进行计数,观察囊泡生长情况,记录囊泡大、小直径,绘制生长曲线.培养结束后,取培养囊泡壁及其囊液分别进行DNA鉴定和蛋白定量.结果 泡球蚴在含肝癌细胞上清液的DMEM中能生长,囊泡直径0.5～5.0 mm;囊液蛋白含量为1.8 mg/ml,囊壁DNA经PCR扩增出Em特异性200 bp条带.结论 1)泡球蚴体外生长因素可不依赖培养细胞本身;2)由于体外与动物体内的培养环境的不同,可能引起囊泡内囊液的蛋白含量有所差异;3)DNA检测证明培养产物为泡球蚴;4)利用肝癌细胞上清液建立泡球蚴体外培养改良模型具有一定的可行性.
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肝癌细胞及其上清液体外培养多房棘球蚴的实验研究
[目的]利用肝癌细胞(Bel-7404)及其培养细胞的上清液,在体外对多房棘球蚴进行培养,观察其在体外的生长、发育过程.[方法]培养肝癌细胞(Bel7404),留取细胞上清液,分别取培养细胞及其上清液与多房棘球蚴囊液进行共培养38d.实验期间对囊泡进行计数,观察囊泡生长情况,记录囊泡大、小直径,绘制生长曲线,培养结束后,取所培养囊泡壁及其囊液分别进行DNA鉴定和蛋白定量.[结果]多房棘球蚴在肝癌细胞(Bel-7404)及其上清液中均能生长,呈出芽生殖方式,囊泡直径1.0～ 5.0 mm;囊液蛋白含量分别为:肝癌细胞,3.8 mg/ml;肝癌细胞上清液,1.1 mg/ml;多房棘球蚴在体外培养初期呈较快速性生长(1～15 d);生长中期可见一平台期(15～26 d);后期保持一个较稳定囊泡数量.并对所培养的多房棘球蚴囊壁DNA经PCR扩增出Em特异性200 bp条带.SDS-PAGE观察体内外培养囊液中蛋白在14、47-66kd处有相似条带.[结论]多房棘球蚴体外生长因素不依赖培养细胞本身,利用肝癌细胞上清液建立多房棘球蚴体外培养模型具有一定的可行性,由于肝癌细胞(Bel-7404)与其培养细胞的上清液所含成分可能不同,可能引起囊泡内囊液的蛋白定量有所差异.
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大肠癌细胞及其上清液体外培养泡球蚴的实验研究
[目的]利用大肠癌细胞(Caco-2)及其培养上述细胞的上清液,在体外对泡球蚴进行培养,建立稳定的体外培养模型,观察泡球蚴的在体外的生长、发育过程.[方法]培养大肠癌细胞(Caco-2),留取细胞上清液.取泡球蚴组织,分别与大肠癌细胞及其细胞培养上清的DMEM完全培养基于37℃5％ CO2培养箱中培养38 d.实验期间对囊泡进行计数,观察囊泡生长情况,记录囊泡大、小直径,绘制生长曲线.培养结束后,取培养囊泡囊液进行蛋白定量.[结果]泡球蚴与大肠癌细胞及其上清液中均能共同生长,呈出芽生殖方式,囊泡直径0.5～5.0mm;囊液蛋白含量分别为:大肠癌细胞,3.2mg/ml；大肠癌细胞上清液,1.2mg/ml.泡球蚴在体外培养初期呈较快速性生长(1～ 15 d)；生长中期可见一平台期(15 ～ 26 d);后期表现为逐渐减少.[结论]多房棘球蚴体外生长因素不依赖培养细胞本身,利用大肠癌细胞上清液建立多房棘球蚴体外培养模型具有一定的可行性,由于大肠癌细胞(Caco-2)与其培养细胞的上清液所含成分可能不同,可能引起囊泡内囊液的蛋白定量有所差异.
