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蛋白酶体β7亚基文献资料
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应用RNA干扰技术对旋毛虫蛋白酶体β7亚基基因功能的研究
目的 研究旋毛虫蛋白酶体β7亚基(T.spiralis proteasome subunit beta type-7,Tspst)的基因功能.方法 通过浸泡法将Tspst特异性的dsRNA(dsRNA-Tspst)导入旋毛虫肌幼虫体内,应用Real-time PCR和Western blot检测经dsRNA-Tspst浸泡处理后幼虫Tspst基因的转录和表达水平.体外培养观察Tspst基因沉默对幼虫存活的影响.将dsRNA浸泡后的幼虫经口接种小鼠,观察Tspst基因沉默对幼虫发育、存活及雌成虫生殖力的影响.结果 Real-time PCR和Western blot检测显示,旋毛虫幼虫经40 ng/μl dsRNA浸泡处理后Tspst基因的转录和表达分别下降71.87％和61.9％ (P＜0.05).dsRNA浸泡处理组、Lip2000和PBS对照组幼虫的死亡率分别是33.4％、35％和35.4％(x2=0.118,P＞0.05).将dsRNA浸泡的幼虫接种小鼠后6d,肠道成虫与35d肌幼虫的减虫率分别为26.51％和38.34％.dsRNA浸泡处理组、Lip2000和PBS对照组幼虫感染小鼠收集的雌虫体外培养72 h新生幼虫产量分别是53.26±3.99、50.80±3.08和53.70±2.57条(P＞0.05).结论 dsRNA可明显抑制Tspst基因的表达及幼虫在小鼠体内的发育和存活.
