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EGF-like文献资料
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柔嫩艾美尔球虫EGF-like结构域基因的克隆及原核表达
目的 克隆并原核表达柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)微线蛋白4(EtMIC4)的EGF-like结构域.方法 收集并纯化柔嫩艾美尔球虫子孢子,用 Trizol法提取总RNA,并反转录成cDNA,利用RT-PCR技术扩增EtMIC4EGF-like基因;回收PCR产物,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-EGF-like.然后亚克隆至原核表达载体pET-30a中,构建重组表达质粒pET 30a-EGF-like并转化至Transetta感受态,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 成功克隆了 EtMIC4 EGFdike(390 bp)基因,双酶切鉴定重组表达质粒pET-30a-EGF-like构建正确.SDS-PAGE分析重组EGF-like蛋白的分子质量单位约为30 ku,Western blot显示该蛋白能被鸡抗柔嫩艾美尔球虫血清识别.结论 成功构建了pET-30a EGF-like原核表达质粒,并证明其原核表达产物EGF-like蛋白具有反应原性,为该蛋白的功能研究奠定了基础.
