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CFP21-ELISPOT方法的建立及其在结核分枝杆菌感染诊断中的应用
目的 用酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)评价检测CFP21蛋白在结核分枝杆菌感染中的诊断效果,同时,比较CFP21、CFP10和ESAT6的应用价值.方法 取28例临床确诊结核患者和26例健康志愿者外周血,分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),用CFP21、CFP10和ESAT6蛋白刺激,定量检测PBMC分泌的特异性γ干扰素(IFN-γ)水平,判断结核分枝杆菌感染情况.用ELISA检测血清抗结核抗体.结果 ELISA检测结核病患者血清结核抗体阳性率为57.1%;以CFP21、CFP10和ESAT6为抗原,用ELISPOT方法检测结核病患者IFN-γ阳性率分别为25.O%、39.3%和32.1%.结论 应用CFP21蛋白作为抗原建立的ELISPOT方法有潜在的临床应用价值,但CFP21作为抗原用于结核分枝杆菌感染诊断的敏感性低于CFP10和ESAT6.
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CFP10/ESAT6融合蛋白-ELISPOT方法的建立及其在结核分枝杆菌感染诊断中的应用价值
目的 建立应用酶联免疫斑点试验(Enzyme Linked -Immunospot Assay,ELISPOT)检测结核分枝杆菌感染的方法,评价CFP10/ESAT6融合蛋白抗原在检测结核分枝杆菌感染中的应用价值.方法 通过比较不同的实验条件确定ELISPOT检测结核分枝杆菌感染方法的佳细胞浓度、孵育时间、蛋白抗原浓度等,建立ELISPOT方法.以PPD皮肤试验作对照.结果 ELISPOT方法的佳实验条件为:每孔细胞浓度2×105,CFP10/ESAT6融合蛋白抗原浓度20～40μg/mL,细胞孵育时间20h.应用PPD皮试检测30例健康体检者、38例非结核疾病患者和40例结核病患者的阳性率分别为40.0%、0%、72.5%,而ELISPOT检测的阳性率分别为20.0%、10.5%、92.5%.应用ELISPOT检测40例结核病痰菌阳性组和阴性组的灵敏度分别为94.4%、90.9%.结论 应用CFP10/ESAT6融合蛋白作为抗原建立的ELISPOT方法可初步应用于诊断结核分枝杆菌感染、辅助结核病诊断.
