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Western-blot鉴定文献资料
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日本血吸虫大陆株14-3-3信号转导蛋白epsilon 亚型基因的表达及鉴定
目的构建日本血吸虫大陆株14-3-3信号转导蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒pBK-Sj14-3-3,并进一步在大肠杆菌中表达和鉴定,为其进一步保护性免疫的研究提供条件. 方法根据日本血吸虫14-3-3蛋白的核苷酸序列,设计合成1对引物,以日本血吸虫大陆株成虫总RNA为模板,用RT-PCR法合成日本血吸虫大陆株14-3-3蛋白epsilon亚型基因cDNA片段.将其克隆入pGEM-T载体,经双酶切及PCR鉴定后,再亚克隆入pBK-CMV真核表达质粒,构建重组质粒pBK-Sj14-3-3,转染到大肠杆菌BL21,双酶切鉴定后,通过IPTG的诱导在大肠杆菌BL21中进行表达及Western-blot鉴定. 结果 RT-PCR产物、 pGEM-T-Sj14-3-3及pBK-Sj14-3-3分别经双酶切均获得一特异性基因片段,其表达产物经SDS-PAGE及Western-blot鉴定后其分子质量为32 ku,并能被抗14-3-3多克隆抗体识别. 结论真核表达重组质粒pBK-Sj14-3-3在大肠杆菌中的表达产物是一分子质量为32 ku融合蛋白,并能被抗14-3-3多克隆抗体识别.
