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重组核酸质粒文献资料
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表达高致病性PRRSV GP3和GP5基因的核酸疫苗构建及小鼠免疫效果评价
目的 构建针对美洲型蓝耳病病毒的重组核酸疫苗,评价其与5种佐剂联合免疫BALB/C小鼠的效果. 方法 构建含有美洲型蓝耳病病毒GP3基因和GP5基因以及CpG-佐剂序列的重组核酸疫苗pVAX-N35HP,分别加入A1佐剂、A2佐剂、A3佐剂、A4佐剂和A8佐剂,免疫BALB/C小鼠,通过中和性抗体、T淋巴细胞亚群及细胞因子检测分析免疫效果. 结果 成功构建重组核酸质粒pVAX-N35-HP.用重组核酸质粒转染BHK-21细胞,Western blot显示重组核酸质粒稳定表达目的蛋白.中和性抗体结果显示,重组核酸疫苗免疫后35 d,pVAX-N35HP+ A1组和pVAX-N35HP+A2组抗体滴度为1∶12;pVAX-N35HP+A3组抗体滴度为1∶16.pVAX-N35 HP组细胞因子IL-4含量为阴性对照组的1.39倍,CD4+T淋巴细胞亚群百分率为阴性对照组的2.35倍(P＜0.01).重组核酸质粒分别与5种佐剂联合免疫小鼠,pVAX-N35HP+A1组CD8+T淋巴细胞亚群百分率为pVAX-N35HP组的1.93倍;pVAX-N35HP+A3组免疫细胞因子IL-4为pVAX-N35HP组的1.41倍(P＜0.05),IFN-γ为pVAX-N35 HP组的3.79倍(P＜0.01);pVAX-N35HP+ A2、pVAX-N35HP+ A4和pVAX-N35HP+ A8组IFN-γ水平升高,CD8+T淋巴细胞数量增多. 结论 成功构建重组核酸疫苗pVAX-N35HP.该疫苗具有良好的免疫原性,其中A1、A3免疫佐剂的加入可增强小鼠细胞免疫和体液免疫水平.
