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伊氏锥虫与路氏锥虫二重PCR鉴别检测方法的建立
目的 建立伊氏锥虫和路氏锥虫二重PCR鉴别检测方法.方法 根据路氏锥虫18S rRNA基因和伊氏锥虫RoTat 1.2 VSG基因特异序列设计两对引物,通过优化PCR反应体系与反应条件,建立种特异二重PCR鉴别检测方法.结果 用建立的二重PCR鉴别检测方法能特异扩增路氏锥虫和伊氏锥虫目的 片段,大小分别为261 bp和482bp;路氏锥虫和伊氏锥虫的低检出量分别均达1个虫体,检测日本血吸虫、杜氏利氏曼原虫与瑟氏泰勒虫等其他血液寄生虫均为阴性.结论 建立的二重PCR检测体系灵敏度高、特异性强,适用于路氏锥虫和伊氏锥虫的感染检测及流行病学调查.
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广东清远地区路氏锥虫人群和宿主动物感染调查
目的 了解清远地区路氏锥虫人群和宿主动物感染情况.方法 2009年在连州市、2010年在佛冈县和清新县、2011年在阳山县和清城区的居民区(自然村)室内、外环境分别采用笼(夹)日法捕鼠(计算鼠密度)；另外采用布电猫网和挖鼠洞等多种方式捕捉活鼠.对各种方法所捕获的全部活鼠取血液涂片染色镜检路氏锥虫感染情况.在调查地区随机采集健康人群血清不少于50份,采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定血清标本中人路氏锥虫抗体.结果 在5个调查地区共检测健康人血清270份,路氏锥虫抗体阳性率为25.93％(70/270),其中,北部地区(连州和阳山)人群血清路氏锥虫抗体阳性率为24.55％ (27/110),南部地区(佛冈、清新和清城)人群血清路氏锥虫抗体阳性率为26.81％ (43/160)(P＞0.05).调查地区的总鼠密度为8.11％ (314/3 874),其中,室内环境家栖鼠密度为8.40％(198/2 358),室外环境野栖鼠密度为7.65％(116/1 516).共涂片检查活鼠385只,路氏锥虫总感染率为12.99％ (50/385)；其中,家栖鼠类(褐家鼠、黄胸鼠和小家鼠)共285只(其中褐家鼠262只),感染率为14.39％(41/285)(其中褐家鼠感染率为13.74％)；野栖鼠类(黄毛鼠、板齿鼠和臭鼩鼱)100只,感染率为9.00％ (9/100).结论 清远地区的健康人群的路氏锥虫抗体水平较高,宿主动物以家栖鼠类为主,褐家鼠是带虫优势鼠种.建议在春秋季节鼠类活动高峰期开展灭鼠工作,同时临床上要注意对可疑病例的排查.
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清远市部分地区鼠类路氏锥虫感染调查
目的 了解广东清远部分地区鼠类路氏锥虫自然感染情况.方法 2009-2010年在连州、佛冈和清新的居民区(自然村)内外环境捕捉鼠形动物,取鼠血液涂片染色镜检.结果 共检查鼠形动物238只,路氏锥虫总感染率为13.87％.连州、佛冈和清新的路氏锥虫感染率分别为18.18％、7.04％、14.71％.共捕获褐家鼠(85.71％)、黄胸鼠(3.78％)、黄毛鼠(7.98％)、板齿鼠(0.84％)、臭鼩鼱(1.68％)5种鼠形动物,褐家鼠的自然感染率为12.75％.不同地区、不同鼠种、不同生态环境的鼠数路氏锥虫感染率差异均无统计学意义(X2=4.352、0.916、3.356,P均＞0.05).结论 清远地区鼠类路氏锥虫自然感染较普遍,褐家鼠是带虫优势鼠种,人群中是否存在可疑病例或隐性感染情况有待进一步探讨.
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广西部分地区褐家鼠自然感染路氏锥虫情况调查及形态学观察
目的 了解广西地区褐家鼠路氏锥虫自然感染情况,以及路氏锥虫形态是否具有地域性差异.方法 从南宁、百色、靖西、桂平4个地区野外和住户周边捕捉褐家鼠,取血涂片染色检查、测量虫体.结果 在4县市共检查褐家鼠137只,路氏锥虫自然感染率平均为11.68%,来自南宁、百色、靖西、桂平县市鼠感染率分别为23.08%、2.5%、35.29%和0.除在百色、靖西发现肥胖形虫体外,其他绝大多数虫体形态基本一致.结论 广西部分地区褐家鼠路氏锥虫自然感染相当普遍,建议在路氏锥虫流行区,对不明原因的高热、贫血患者应做相关检查排除本虫感染.在百色、靖西发现的肥胖形虫体是否是路氏锥虫的变异,或是不同种属虫体,有待于进-步研究确认.
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广西褐家鼠感染路氏锥虫分子生物学鉴定及系统发育分析
目的 对广西部分地区褐家鼠感染的路氏锥虫进行分子生物学鉴定,分析不同地理种群间的遗传分化.方法 从广西靖西、百色、南宁、天峨4地感染路氏锥虫的褐家鼠脾脏或血凝块中提取DNA,设计ITS1保守引物进行PCR扩增,将PCR产物直接或克隆删序.用DNAstar7.1进行同源性比对,用Mega4.0进行差异分析与聚类、构建系统进化树.结果 广西各地血涂片阳性鼠标本均扩增出特异性DNA条带,4地样品测序结果与GenBank上登录的路氏锥虫(T.lewisi)序列的同源性均高达96%以上.区内各地理种群之间遗传距离均在0.021以下,与其他3个近缘种T.otospermophili、T.grosi、T.kuseli间遗传距离为0.15～0.206.结论 广西4地鼠感染的锥虫为路氏锥虫.ITS1可以作为路氏锥虫的种属分类和分子诊断的标记.
