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EB病毒mir-BART-5促鼠成纤维细胞恶性表征机制研究
目的 探讨EB病毒mir-BART5可促进鼠成纤维细胞恶性表征的作用机制. 方法 生物信息学分析显示miR BART5与miR-18序列相近,miR 18的靶基因表达的结缔组织生长因子(CTGF)可促进细胞增殖.在鼠成纤维细胞NIH/3T3中瞬时转染mir-BART5-mimics使其表达上调,采用Western blot检测对照组与转染组细胞的CTGF表达,采用体外软琼脂集落生成试验观察两组细胞生长的恶性表征. 结果 转染组细胞在软琼脂上呈恶性表征.CTGF在转染组中表达上调(P＜0.05),导致NIH/3T3细胞增殖能力增强. 结论 EBV病毒miR BART5通过调控miR 18途径上调CTGF的表达,从而促进细胞的恶性表征.
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EB病毒编码miR-BART5作用于PUMA基因抑制肺癌细胞凋亡
目的 探讨肺癌组织中EB病毒(EBV)感染情况、EBV编码miR-BART5在肺癌组织中表达及对肺癌细胞凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量PCR技术检测非小细胞肺癌组织和肺良性病变组织中EBV DNA载量及EBV编码miR-BART5的表达情况;在宣威肺腺癌细胞系中构建PUMA基因和miR-BART5表达载体,利用荧光素酶报告系统验证PUMA与miR-BART5关系.使用噻唑蓝比色法(MTT)分析转染后不同时间段细胞增殖情况.通过caspase3/7、9活性检测研究miR-BART5、PUMA基因在肺癌细胞凋亡中的作用.结果 30例肺癌组织中EBV DNA阳性11例(36.67％),30例肺良性病变组织中均阴性.miRNA-BART5在EBV阳性肺癌组织中表达量(3.46±0.54)明显高于EBV阴性肺癌组织(1.98±0.46)和EBV阴性肺良性病变组织(1.12±0.32),差异有统计学意义(P均＜0.05);EBV阴性肺癌组织与EBV阴性肺良性病变组织中miRNA-BART5表达差异无统计学意义(P＞0.05).荧光素酶报告基因分析显示,miR-BART5能够作用于PUMA基因3'UTR端.MTT结果显示,转染0、24、48、72 h后,miR-BART5组吸光度(A)值分别为0.8、0.93、1.18、1.2,细胞正常增殖;无意义序列(scrambled siRNA)转染组A值分别为0.71、0.80、0.90、0.99,生长未受到明显抑制;miR-BART5过表达(Over-miR-BART5)载体转染组A值为0.90、0.99、1.57、2.20,与miR-BART5组相比均增加;miR-BART5抑制表达(In-miR-BART5)载体转染组A值为0.70、0.67、0.56、0.48,与miR-BART5组相比,在转染24h后出现明显抑制,且随时间的推移,抑制程度越明显;miR-BART5过表达载体转染组中caspase3/7、9活性(3 646 ±334、5 533±112)相对于miR-BART5抑制表达载体转染组中caspase3/7、9活性(10 145±398、10 576±915)显著降低.结论 肺癌组织中EBV呈现较高的感染率;在EBV DNA阳性肺癌细胞中,miR-BART5可能通过抑制PUMA基因的表达进而抑制肺癌细胞凋亡.
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EBV相关性胃癌患者血浆miRNAs表达谱的研究
目的 探讨EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric carcinomas,EBVaGCs)患者血浆中EBV-miRNAs表达水平及其临床意义.方法 收集226例胃癌患者和56例非EBV感染相关的肿瘤患者外周血,采用RT-PCR检测EBV-DNA,荧光定量Real-time RT-PCR分析EBV-miRNAs表达谱,结合组织病理和影像学检查结果分析这些miRNAs的临床意义.结果 在胃癌患者中,有177例EBV阴性胃癌和49例EBVaGCs患者.在EBVaGCs中,EBV-miR-BART5的表达水平是RNU6B的3.5倍,而EBV-miR-BART1、miR-BART1-2、miR-BART7及miR-BART10分别为2.4、2.0、3.1、2.9倍.EBV-miRNAs在低分化胃癌中均高表达,EBV-miR-BART5和miR-BART7在中高分化胃癌表达差异具有统计学意义(P＜0.05),但EBV-miR-BART1、miR-BART1-2和miR-BART10表达差异无统计学意义(P＞0.05).85.7％ (42/49) EBVaGCs患者二程化疗后症状缓解,12.2％ (6/49)局部侵袭,2.0％(1/49)淋巴结转移;而64.4％ (114/177) EBV阴性胃癌患者二程化疗症状缓解,20.3％ (36/177)局部侵袭,10.7％ (19/177)淋巴结转移,4.5％ (8/177)远处转移.结论 EBV-miR-BART5和miR-BART7可作为EBVaGCs无创诊断、治疗和预后的生物标志物;EBVaGCs患者预后比EBV阴性胃癌好.
