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2011-2013年河北地区医院烧伤患者铜绿假单胞菌耐药株oprD基因突变分析
目的 分析铜绿假单胞菌oprD基因突变情况及其与耐药性的关系,以指导烧伤患者感染的临床治疗. 方法 采用体外药敏试验分析铜绿假单胞菌的耐药情况,然后进行oprD基因的PCR扩增,采用双脱氧链末端终止法对其进行测序分析. 结果 药敏试验中头孢噻肟、氨苄西林、头孢唑林对铜绿假单胞菌的抑菌圈直径均为6 mm,即该菌对上述抗生素均具有耐药性.头孢哌酮、哌拉西林、头孢吡肟、美罗培南、阿米卡星、环丙沙星对铜绿假单胞菌的抑菌环直径范围分另为6～22 mm、6～20 mm、6～20 mm,6～28 mm,6～22mm和6～32mm,即该菌对这6种抗生素产生了不同程度的耐药.美罗培南大抑菌直径为28 mm,环丙沙星为32 mm,可优先用于治疗烧伤患者铜绿假单胞菌感染.通过PCR扩增oprD基因,其大小为1 340 bp;采用双脱氧链终止法对铜绿假单胞菌菌株oprD基因测序,在279位发生C→G的碱基替换,302位发生T→C的碱基替换,334位发生A→G的碱基替换,350位发生T→C的碱基替换,380位发生A→G的突变. 结论 oprD基因缺失或其基因片段上的碱基替换引起的基因突变与铜绿假单胞菌的耐药性密切相关,可供烧伤患者感染的临床治疗及抗生素使用提供指导.
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铜绿假单胞菌亚胺培南中介菌株oprD基因分析
目的 分析铜绿假单胞菌临床分离株对亚胺培南耐药机制.方法 采用VITEK32系统分析临床菌株耐药性;纸片协同法和纸片扩散法分析金属 β 内酰胺酶和AmpCβ 内酰胺酶活性;十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法分析临床菌株的外膜蛋白OprD的表达;PCR法扩增基因oprD并测序分析;随机扩增多态性DNA标记方法对临床菌株进行分型.结果 7株菌确认为亚胺培南中介株,其中2株菌外膜通道蛋白OprD可能存在缺失,进一步分析发现其编码基因被插入序列ISRP10阻断.其余5株菌OprD蛋白大小存在差异,相应编码区大小为427~443个氨基酸,OprD蛋白二级结构转角区域L1-L8处均存在多种氨基酸替代或缺失.结论 铜绿假单胞菌被插入序列ISRP10阻断失能,或其外膜蛋白基因oprD及OprD蛋白二级结构转角区域的氨基酸突变,导致临床分离株对亚胺培南呈中介.
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耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及其耐药机制的研究
目的 探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及其耐药机制.方法 收集2016年1月至2017年12月东莞地区2家医院110株耐亚胺培南铜绿假单胞菌,采用VITEK2系统分析临床菌株耐药性,脉冲场凝胶电泳(PFGE)行同源性分析,PCR法检测金属β-内酰胺酶相关基因以及oprD基因,并对阳性株进行测序;对oprD基因无中断突变株,利用qRT-PCR检测其mRNA表达情况.结果 110株耐亚胺培南铜绿单胞菌PFGE分析结果显示高度克隆多样性.PCR法检测出18株金属β-内酰胺酶基因阳性的菌株,主要类型是:IMP-25,VIM-2,SIM-2.PCR法检测出107株阳性菌株,测序结果表明有意突变率高达93.46％(100/107),类型包括点突变,缺失突变,插入突变以及提早终止突变.7株oprD mRNA表达量均降低.结论 本实验进一步证实了oprD基因缺失,发生广泛有意突变,mRNA表达减少以及金属β-内酰胺酶基因产生是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要机制.
