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点印迹杂交文献资料
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恙螨体内肾综合征出血热病毒基因的套式PCR检测
目的:检测恙螨体内微量肾综合征出血热病毒(HFRSV)基因.方法:选择HFRSV膜蛋白(MP)基因的保守区核苷酸序列合成两对引物,采用异硫氰酸胍一步抽提RNA,建立了反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测鼠体恙螨及游离恙螨体内HFRSV-RNA的方法,扩增产物经凝胶电泳及点印迹杂交证实具有特异性.结果:HFRSV抗原阳性鼠体恙螨50只组、10只组、游离恙螨50只组,经RT-PCR检测为阳性;HFRSV抗原阳性鼠体恙螨5只组,HFRSV抗原阴性鼠体恙螨50只、10只和5只组,游离螨10只和5只组均未见明显扩增带.进一步用Nested RT-PCR检测,在RT-PCR未检测出HFRSV-RNA各组中均检测有HFRSV-RNA,低检出为5只螨组.并用核酸分子杂交技术进一步证实了上述结果.结论:Nested RT-PCR具有高特异、高敏感的特点,可用于检测恙螨体内微量HFRSV-RNA,从分子生物学角度为恙螨作为HFRSV的传播媒介提供了直接证据.
