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蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)文献资料
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蛇毒金属蛋白酶抑制剂基因的合成及杆状病毒表达载体的构建
研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建.根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经Sac Ⅰ及Xho Ⅰ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)中,PCR扩增、酶切及测序鉴定;根据测序结果用定点突变法逐一改正错误位点.随后将该基因插入到转座载体pFastBac HT C的MCS中,转化大肠杆菌DH5 α-T1,以LB/AP平板筛选阳性重组子,PCR扩增、酶切鉴定,提取pFastBac HT C-BJ46a重组体进一步转化DH10Bac感受态细胞,48h后通过蓝白筛选,挑取单个白色菌落划线,证实所得菌落均为白斑,挑克隆PCR鉴定.结果 表明成功构建杆状病毒重组转座载体、重组穿梭载体.含BJ46a基因的重组杆状病毒感染Sf 9昆虫细胞,获得目的蛋白的表达.BJ46a基因的合成及杆状病毒表达载体的成功构建,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础.
