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5-氟尿嘧啶载自组装水凝胶纳米粒的制备及体外释放
本实验以乙酰化普鲁兰(PA)为基质材料,采用透析法制备新型自组装水凝胶纳米粒,用以增强5-氟尿嘧啶的药物靶向性及药物选择活性,从而达到降低其毒副作用的目的.用傅立叶红外光谱仪(FT-IR)、动态光散射仪(DLS)和场发射扫描电镜(FE-SEM)对其进行表征.分别测量不同浓度、温度以及储存时间下,PA纳米粒的粒径的变化情况,以研究环境因素的改变对PA纳米粒的粒径及其粒径分布的稳定性影响.使用透析方将5-氟尿嘧啶(5-FU)物理包封于自组装纳米粒中,并模拟人体环境进行了体外释放研究.结果表明,PA纳米粒在不同环境条件下,粒径基本保持恒定,具有良好的稳定性;PA纳米粒的粒径在100nm左右,具有良好的表面球形度且分布均匀;不同环境条件变化下,粒径基本保持恒定,具有良好的稳定性;在18h内,5-FU释放量达70%左右,具有明显的缓释作用.乙酰化程度越低,5-FU的缓释效果越好,但载药量略有下降.PA纳米粒是非常具有应用前景的新型5-FU药物载体.
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胆甾醇基-普鲁兰多糖疏水改性材料的制备及其自组装性质的研究
目的:经琥珀酸间隔臂将胆甾醇连接到普鲁兰分子链上,对普鲁兰多糖进行疏水改性,获得不同取代度的胆甾醇基-普鲁兰(cholesterol-modified pullulan,CHSP)改性材料,并研究CHSP材料在水中的自组装性质.方法:利用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)催化琥珀酰胆甾醇(cholesterol succinate,CHS)与普鲁兰多糖反应,将琥珀酰胆甾醇接枝在普鲁兰分子链的羟基上,得到疏水改性的普鲁兰多糖衍生物.应用傅立叶红外光谱仪(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR),核磁共振仪(proton nuclear magnetic resonance,1H-NMR)对产物进行表征.利用透析法制备自组装纳米球.通过透射电镜(transmission electron microscopy,TEM),动态激光粒度分析仪(dynamic laser light scattering,DLS)表征了纳米粒的形态和粒径.以芘为荧光探针,通过荧光检测分析,测定CHSP的临界胶束浓度(critical micellar concentration,CMC).结果:通过FT-IR,1H-NMR确证,合成了胆甾醇接枝普鲁兰多糖材料.制备材料在水溶液中能够自组装成纳米粒.结论:利用EDC和DMAP催化能够有效合成胆甾醇基.普鲁兰多糖改性材料,此制备方法简单且易于操作.改性材料在水中有效自组装成纳米粒,制备球形CHSP纳米粒有望成为疏水性药物载体.
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乙酰普鲁兰纳米粒子BeWo b30细胞毒性及摄取研究
目的：通过乙酰普鲁兰纳米粒子对人绒毛膜癌细胞( BeWo b30)的细胞毒性以及细胞摄取研究,为普鲁兰基纳米药物跨胎盘屏障机制及妊娠期用药提供科学依据。方法以透析法制备异硫氰酸荧光素标记的乙酰普鲁兰纳米粒子( fluorescein isothiocyanate labelled pullulan acetate nanoparticles, PA-FITC NPs),分别利用激光粒度分析仪、扫描电镜、透射电镜考察乙酰普鲁兰纳米粒子粒径、Zeta电位、形貌及结构；用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8, CCK-8)检测细胞生长曲线,考察不同浓度纳米粒子(0.4~2.0 mg/mL)对BeWo b30细胞的细胞毒性；考察纳米粒子浓度、孵育时间、孵育温度对BeWo b30细胞摄取纳米粒子的影响。结果 PA-FITC纳米粒子水合直径为(348.0±114.3)nm,Zeta电位为(－26.0±5.1)mV,呈表面光滑、内部结构规整的球形。 PA-FITC纳米粒子在0.4~2.0 mg/mL 浓度范围内细胞存活率为95.0％~100.5％,差异无统计学意义( P>0.05)；BeWo b30细胞摄取实验表明：细胞吞噬纳米粒子的量随着PA-FITC NPs的浓度升高和孵育时间延长而增大；当孵育温度从37℃降低至4℃,PA-FITC NPs的细胞摄取量显著降低(P<0.05)。结论乙酰普鲁兰纳米粒子呈球形,对BeWo b30细胞无明显细胞毒性；BeWo b30细胞摄取PA-FITC 纳米粒子与纳米粒子浓度、孵育时间和孵育温度呈正相关。
关键词： 普鲁兰 BeWo b30细胞 纳米药物 妊娠期用药 -
多糖分子质量与配基连接臂长度对改性普鲁兰药物载体的性质影响
目的 研究普鲁兰分子质量和胆固醇配基连接臂长度对胆固醇改性普鲁兰自组装、载药及体外释放等性质的影响.方法 将胆固醇通过2种长度的连接臂共价修饰到2种分子质量的普鲁兰多糖上,合成不同取代度的胆固醇改性普鲁兰(共8种),使其在水中组装成纳米粒,并考察多糖分子质量及连接臂长度对纳米粒形态、粒径的影响.同时,以阿霉素、米托蒽醌为模型药物,考察其在改性普鲁兰多糖纳米粒中的包封及释放行为特征.结果 所有改性普鲁兰多糖均可形成纳米粒,包封药物后可形成载药纳米粒;多糖分子质量和连接臂长度对其性质具有一定的影响.结论 载药前,分子质量较大、连接臂较短的改性多糖具有更好的稳定性;载药后,其对药物的包封、粒径、体外释放行为的影响规律与药物种类相关.
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生物素化乙酰普鲁兰多糖耦联CD3纳米粒的制备及T细胞摄取效应
目的 细胞毒T淋巴细胞是抗肿瘤免疫的主要效应细胞,纳米粒表面经特异性抗体修饰可使其靶向并激活T细胞.文中探讨生物素化乙酰普鲁兰多糖纳米粒耦联CD3抗体(Bio-PA-CD3 NPs)对CD8+T细胞增殖及细胞因子分泌及摄取效应的影响.方法 超声透析法制备了3种生物素取代度Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6.3-PA-CD3 NPs,CD3抗体耦联于纳米粒表面.比较3种纳米粒的粒径,Zeta电位;CCK-8法检测对CD8+T细胞增殖的影响,ELISA试剂盒测定纳米粒对CD8+T细胞分泌的3种细胞因子含量.流式细胞仪定量分析细胞摄取Bio-PA-CD3 NPs.结果 Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6.3-PA-CD3 NPs表面CD3抗体浓度分别为(36.1±4.4)、(21.4±4.3)和(10.3±4.7)μg/mg.耦联CD3抗体的纳米粒与CD8+T细胞共孵育48 h,NPs浓度为50、100、200μg/mL时,与同一生物素取代度Bio-PA NPs比较,Bio-PA-CD3 NPs明显促进细胞增殖(P<0.05);共孵育96 h,NPs浓度为1、10、50、100、200μg/mL时,与同一生物素取代度Bio-PA NPs比较,Bio-PA-CD3 NPs明显促进细胞增殖(P<0.05).当NPs浓度为10μg/mL时,Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IL-2的分泌;当NPs浓度为50μg/mL时,Bio1.6-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IFN-γ的分泌;Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进TNF-β、IL-2的分泌;当NPs浓度为100、200μg/mL时,Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IFN-γ、TNF-β、IL-2的分泌(P<0.05).流式结果显示CD8+T细胞对Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6.3-PA-CD3 NPs 3组纳米粒摄取率荧光强度峰值左移,即荧光强度逐渐降低.结论 制备的耦联抗体的普鲁兰多糖纳米粒有望作为一种提高T细胞免疫效应的制剂.
