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几种丝素材料细胞毒性的实验研究
目的:研究不同交联方式的再生丝素膜(WL组,SD组,HY组)的细胞毒性及其影响细胞增殖的因素.方法:采用浸提液法,体外培养鼠胚真皮层纤维细胞,用MTT法检测细胞增殖活力和计算相对增殖率.结果:WL组,SD组再生丝素膜细胞毒性小于1级,有较强的增殖活力;HY组再生丝素细胞毒性0～2级;而用高浓度环氧交联剂交联的再生丝素膜对细胞生长有一定抑制作用;且随着环氧交联剂浓度的增加,细胞毒性增大.结论:WL组和SD组再生丝素膜无细胞毒性,HY组再生丝素膜无明显的细胞毒性,高浓度环氧剂交联的再生丝素膜对细胞有一定的毒性,有待于进一步改性.
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丝素蛋白膜上褐藻糖胶的固定化及其体外抗凝血性能
以戊二醛为交联剂,将褐藻糖胶固定在NH3等离子体处理的丝素膜的表面上.用FTIR、Uv分析了褐藻糖胶的结构;采用XPS分析了丝素膜表面元素;采用部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(Pr)和凝血酶时间(TT)对其体外抗凝血活性作了初步的评价.丝素膜表面固定褐藻糖胶后,抗凝血性有了一定的提高.经稳定性测试,固定的褐藻糖胶仍具有一定的抗凝血性.
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应用丝素膜真皮支架对创面愈合过程中成纤维细胞功能的影响
目的:动态观察创面应用丝素膜真皮支架对创面修复过程中成纤维细胞(Fb)功能的影响.方法:50只雄性SD大鼠,随机分为聚乙烯醇海绵组(海绵组)和丝素膜组(n=25).于大鼠背部正中切取皮肤制成2 cm×2 cm全层皮肤缺损创面,分别在创面埋植聚乙烯醇海绵(海绵组)或丝素膜(丝素膜组),再覆以自体刃厚皮缝合.术后1、2、3、4、6周取移植物及其周围组织,HE染色观察其组织形态学变化,免疫组化法检测组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1 (TGF-β1)的表达,TUNEL法检测细胞凋亡水平.结果:光镜观察发现,术后1～2周,丝素膜组肉芽组织化较海绵组快,胶原纤维较密集;术后6周,与海绵组相比,丝素膜组胶原纤维较粗大,组织相对成熟.术后组织中α-SMA及TGF-β1表达增加,α-SMA表达量于术后2周达到高峰,之后逐渐下降.丝素膜组α-SMA表达量低于海绵组,在第1、6周与海绵组比较差异有显著性(P＜0.01):海绵组TGF-β1表达量于术后2周达到高峰,丝素膜组于术后第3周达高峰,除第3周外,丝素膜组TGF-β1表达量均低于海绵组,在第1、2、6周与海绵组比较差异有显著性(P＜0.01).丝素膜组细胞凋亡率在术后各时相点均显著高于海绵组(P＜0.01).结论:丝素膜与自体刃厚皮复合移植后,可不同程度减少Fb中α-SMA及TGF-β1的表达,并促进细胞凋亡,加快组织重塑,有利于组织修复的完成,对防止瘢痕过度形成具有积极意义.
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骨髓间质细胞在丝素膜上生物相容性研究
目的 通过研究骨髓间质细胞在丝素膜上的贴壁、生长繁殖情况及对细胞遗传学的影响,探讨生物相容性.方法 将兔骨髓间质细胞分别接种于多孔丝素膜、致密丝素膜和脑膜卫士等生物材料上,采用细胞计数法和染色体检测法,研究丝素膜对细胞贴壁、生长繁殖情况及染色体的影响.结果 丝素膜能支持细胞在其表面贴壁,生长曲线和染色体正常.结论 丝素膜对骨髓间质细胞有良好的生物相容性.
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丝素膜代人工硬脑膜的相容性研究
目的了解丝素膜血液与组织相容性,探讨丝素膜成为人硬脑膜修补材料的可能性.方法将致密丝素膜、多孔丝素膜和对照组的牛心包、蚀原海绵行复钙、溶血和血小板粘附试验.在此基础上,新西兰兔麻醉后,取额顶部正中切口,作双侧颞顶部开颅,在显微镜下,椭圆形剪除硬脑膜和蛛网膜1.0×0.8cm,硬脑膜缺损处分别用牛心包和不同丝素膜膜修补.观察术后过程.结果四种材料的血液相容性良好.植入后的实验用兔,没有发现伤口感染、脑膜炎及抽搐,行为及进食无异常变化.早期,局部炎症反应轻微.晚期,呈现轻度慢性炎性反应.脑皮质形态正常.结论对制作工艺加以改进,丝素膜有望成为一种新型的脑膜替代材料.
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Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原在丝素膜移植修复兔眼睑中的表达
目的 研究Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原在丝素膜移植修复兔眼睑中的表达,探讨应用丝素膜行眼睑重建的愈合机制.方法 将健康新西兰大白兔36只随机分为丝素膜修复组(n=18)和异体巩膜修复组(n=18),均制作右跟上睑板缺损模型,分别植入丝素膜和异体巩膜予以修复.左眼为正常对照.各组于术后第1、2、4周取手术区域上眼睑,苏木精伊红(HE)染色观察组织形态学变化,免疫组织化学法检测眼睑中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达.结果 所有兔眼睑缺损均Ⅰ期愈合.HE染色结果显示,术后移植区炎性细胞浸润异体巩膜组多于丝素膜组.免疫组化染色结果显示,丝素膜组和异体巩膜组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达随着术后观察时间的增加而增加.术后各时间点Ⅰ型胶原的表达为异体巩膜组＞丝素膜组＞正常对照组(1周:F=19.586,P＜0.01;2周:F =30.041,P＜0.01;4周:F=32.587,P＜0.01).术后各时间点Ⅲ型胶原的表达为异体巩膜组＞丝素膜组＞正常对照组(1周:F=19.220,P＜0.01;2周:F=39.414,P＜0.01;4周:F=49.680,P＜0.01).结论 丝素膜移植修复兔眼睑缺损Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达较异体巩膜少,愈合反应较异体巩膜轻,可用于眼睑重建.
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丝素膜血液相容性研究
目的了解丝素膜的血液相容性.方法将致密丝素膜、多孔丝素膜和对照组的牛心包、蚀原海绵行复钙试验、溶血试验、血小板粘附试验.结果复钙时间:致密丝素膜较多孔丝素膜、牛心包、蚀原海绵延长,致密丝素膜与后三者之间有显著性差异(P<0.01),后三者之间无显著性差异.溶血率:致密丝素膜3.28%,多孔丝素膜2.02%,牛心包0.19%,蚀原海绵0.28%,均小于5%,均不引起溶血.血小板粘附试验:四种材料表面血小板均没有明显变形,致密丝素膜表面粘附的血小板较其余三种材料少.结论丝素膜具有良好的血液相容性.致密丝素膜有一定的抗凝特性.
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新生大鼠嗅鞘细胞在再生丝素膜上的生长
目的观察新生大鼠嗅鞘细胞在再生丝素膜上的生长情况,探讨再生丝素膜在嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤中成为细胞培养基质的可能性.方法采用静置贴壁培养法体外培养分离的新生大鼠嗅鞘细胞,免疫酶和免疫荧光方法染色鉴定,观察在再生丝素膜上嗅鞘细胞的生长,并用MTT法测定细胞生长曲线.结果再生丝素膜对新生大鼠嗅鞘细胞的贴壁能力和形态未见明显改变,也未见明显毒性,并能支持细胞正常生长,呈现正常的生长繁殖曲线.结论再生丝素膜对新生大鼠嗅鞘细胞具有良好的细胞相容性.
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再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞生长的影响
目的研究再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞生长的影响.方法采用静置贴壁培养法在再生丝素膜上体外培养鼠胚真皮层成纤维细胞,并用活细胞计数法及MTT比色法观察再生丝素膜对细胞的形态、功能和生长的影响.结果再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞的贴壁能力和形态及其代谢功能未见明显改变,也未见明显毒性,并能支持细胞正常生长,呈现正常的生长繁殖曲线.结论再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞具有良好的细胞相容性.
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丝素膜移植兔眼睑原位重建的研究
背景 利用自体或异体组织进行活体组织重建存在着供体材料少、易发生排斥反应等问题.研究证实,作为组织工程细胞支架,丝素膜有良好的生物相容性,但其是否可作为组织替代物尚未见报道.目的 探讨应用丝素膜行眼睑原位重建术的可行性.方法健康新西兰大白兔18只,双眼上眼睑制作眼睑板缺损4 mmx3 mm模型,右眼采用再生丝素膜材料进行上睑板重建术为丝素膜组,左眼采用同种异体巩膜材料行睑板重建为异体巩膜组,活体观察4周.采用随机数字表法将实验兔分为3组,每组6只,分别于术后第1、2、4周用空气栓塞法处死实验兔,收集带有移植片的兔眼睑制作石蜡切片,苏木精—伊红染色观察术区炎性细胞的浸润情况；用Masson染色法观察植片区胶原组织的形成和分布情况；应用免疫组织化学法检测植入区碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达；采用ImagePro Plus分析软件对免疫组织化学结果进行半定量分析.结果所有兔眼眼睑缺损均Ⅰ期愈合,睑结膜面光滑,眼表炎症反应不明显,但异体巩膜组睑缘切迹较丝素膜组明显.组织学检查结果显示,术后随着时间的延长,移植区炎性细胞浸润逐渐减轻,术后4周丝素膜组术区胶原纤维排列整齐,结缔组织增生不明显；异体巩膜组术区胶原纤维排列相对紊乱,瘢痕组织增生较明显.术后第1、2、4周,丝素膜组术区组织中bFGF的表达量(A值)分别为0.027 67±0.004 69、0.051 73±0.008 72、0.058 72±0.006 88,巩膜组分别为0.056 48±0.009 14、0.072 83±0.009 17和0.078 73±0.010 84,两组各时间点bFGF表达量的差异均有统计学意义(t=-6.38、t=-4.99、t=-2.87,P＜0.05).结论丝素膜作为眼睑原位重建术睑板的替代物组织相容性好,能有效恢复睑板形态,可替代异体巩膜重建眼睑.
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丝素膜代人工硬脑膜的组织相容性研究
目的探讨丝素膜为人硬脑膜修补材料的可能性.方法取新西兰兔额顶部正中切口,作双侧颞顶部开颅术,在手术显微镜下,剪除兔硬脑膜和蛛网膜 1.0 cm× 0.8 cm,硬脑膜缺损处分别用牛心包和不同的丝素膜膜修补.结果术后无伤口感染、脑膜炎及抽搐现象,行为及进食无异常变化.早期,局部炎症反应轻微.晚期,呈轻度慢性炎性反应,致密丝素膜与脑皮层之间可见薄层假膜形成.脑皮质形态正常.结论对制作工艺加以改进,丝素膜有望成为一种新型的脑膜替代材料.
