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非清髓性骨髓移植诱导异基因受者小鼠免疫耐受的实验研究
本研究通过非清髓性预处理方案联合髓腔内骨髓移植(IBM-BMT)建立异基因小鼠免疫耐受模型,并探讨其诱导耐受的机理.受鼠为雌性C57BL/6(H-2b,B6)小鼠,于第0天接受60Co γ线全身照射(TBI),4小时内输注雄性BALB/c(H-2d)小鼠来源的骨髓细胞(BMC),2天后腹腔注射环磷酰胺(CTX).通过皮肤移植、混合淋巴细胞反应(MLR)检测耐受状态,并通过体外过继转移实验、IL-2逆转实验等探讨免疫耐受的机制.结果显示,经骨髓移植的B6小鼠对BALB/c小鼠的皮肤移植物平均存活时间(MST)＞150天,较对照组明显延长(P＜0.01);骨髓移植后第90天,受鼠(黑色)表型开始呈现供鼠(白色)颜色特征.MLR结果证明,B6小鼠获得供体特异性耐受,该耐受可以被IL-2逆转且可被过继转移;所有受鼠均未出现GVHD表现.结论:非清髓预处理联合髓腔内骨髓移植可以有效地诱导异基因小鼠免疫耐受,克隆无能、抑制细胞存在及嵌合体产生均参与耐受的形成.
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移植早期宿主成熟T细胞的灭活在诱导特异性免疫耐受中的作用
目的 探讨参与早期急性排斥反应并导致非清髓性治疗诱导特异性免疫耐受失败的主要免疫细胞.方法 通过动态观察受者三种不同预处理方案的骨髓移植后早期各阶段在外周血、脾脏、胸腺中的嵌合状态,再用T细胞敲除小鼠作为受者,以验证宿主成熟T细胞在急性排斥反应与诱导特异性免疫耐受中的重要作用.结果 亚致死量全身放射治疗TBI(450cGy)+BMT骨髓移植治疗组的BALB/C受者移植心脏均出现排斥反应,存活时间<38 d,骨髓移植后第7天在受者的外周血、脾脏中仍存活一定数量的宿主成熟T细胞(分别为0.23%与0.48%).T细胞基因敲除C57 BL/6小鼠作为受者,给予单次TBI(450cGy)+BMT治疗,其移植心脏获长期存活,并获得完全嵌合状态.结论 移植早期彻底清除或灭活宿主成熟T细胞是预防早期排斥反应的关键,也有利于供者骨髓T细胞植活,这对临床制定诱导特异性免疫耐受治疗方案有着重要意义.
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非清髓性骨髓移植的动物实验研究
目的建立非清髓性骨髓移植的小鼠动物模型,探讨非清髓预处理条件下能否实现异基因造血细胞的植活,探讨输入的异基因造血细胞数量和移植植活的关系.方法以雌性C57BL/6小鼠为异基因骨髓移植的受者,雄性BALB/c小鼠为异基因骨髓移植的供者,采用非致死剂量的环磷酰胺腹腔注射(200mg/kg)加γ射线全身照射(5 Gy)为非清髓性预处理方案,将移植受鼠分为A、B、C 3组,每组10只,分别给予2×107、8×106和2×106个供鼠骨髓细胞,移植后第36天用聚合酶链式反应检测受鼠骨髓细胞内Y染色体特异性基因检测移植物植活.结果在移植A、B和C组中分别有8、3和0只小鼠检测到了异基因造血细胞的植活,经过统计学检验发现A组小鼠的植活比例高于其余两组.结论非清髓的预处理条件下可以实现异基因骨髓移植的成功植入;加大移植物中造血前体细胞的数量有助于克服移植供、受者间主要组织相容性(MHC)间的差异和促进移植物植活.
