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骨髓内皮细胞产生造血抑制因子
本研究探讨骨髓内皮细胞分泌的造血抑制因子在扩增造血祖细胞中的作用并初步探讨其作用机制.收集无血清膏髓内皮细胞条件培养液(BMEC-CM),离心超滤,获得＞10 kD和＜10 kD的组分,以观察BMEC-CM原液及其＞10 kD和＜10 kD组分对CFU-GM及HPP-CFC的增殖作用的影响;检测骨髓内皮细胞及BMEC-CM中抑制因子的表达,用抗体中和实验检测BMEC-CM中的抑制因子对造血集落的抑制活性;用膜杂交法检测抑制因子联合造血刺激因子扩增造血细胞时增殖与分化相关基因的改变.结果表明:①BMEC-CM,＞10 kD及＜10 kD组分分别加入集落培养体系,BMEC-CM对CFU-GM及HPP-CFC的生成无明显影响,＞10 kD组分增加CFU-GM及HPP-CFC的生成,＜10 kD组分抑制CFU-GM及HPP-CFC的生成.②BMEC-CM,＞10 kD及＜10 kD组分分别加入骨髓细胞液体培养体系培养24小时后,BMEC-CM组CFU-GM明显减少,HPP-CFC显著增加;＞10 kD组分组CFU-GM明显增加,HPP-CFC无显著改变;＜10 kD组分组CFU-GM及HPP-CFC均明显减少.③小鼠骨髓内皮细胞表达MIP-2,MIP-1α,MSP,TGF-β,TNF-α,IFN-γ及Tβ4.BMEC-CM中存在有MIP-2,MIP-1α,MSP,TGF-β,TNF-α和Tβ4.④抗体中和实验结果表明在BMEC-CM中的TGF-β,MSP,MIP-1α,IFN-γ和Tβ4有明显抑制活性.⑤Tβ4与SCF,IL-3,IL-6,GM-CSF和EPO联合加入CD34+细胞扩增体系时,HPP-CFC明显增加,细胞增殖与分化相关基因及信号传导相关基因的表达较单用造血刺激因子组明显减弱或缺失.结论:BMEC-CM能显著促进早期造血祖细胞HPP-CFC增殖,其作用与BMEC-CM中存在的抑制因子的作用有关.这种作用可能是通过影响细胞增殖、分化及信号传导相关基因来实现的.
