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西达本胺诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及与DNA损伤反应的相关性
目的:本研究旨在探讨新型组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDACi)西达本胺对人多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡的影响及其与DNA损伤反应(DDR)的相关性.方法:采用MTT法检测西达本胺对MM细胞系RPMI8226的增殖抑制作用;应用流式细胞术分析靶细胞凋亡及细胞周期分布;采用Western blot检测靶细胞目标蛋白表达;应用ATM激酶特异性抑制剂KU-55933干扰DDR过程.结果:西达本胺对RPMI 8226细胞的增殖抑制作用呈时间剂量依赖性,其24、48和72 h IC50值分别为9.6,6和2.8 μmol/L.西达本胺通过上调RPMI 8226细胞p21蛋白表达,将细胞周期阻滞于G0/G1期.西达本胺通过caspase-3依赖的途径诱导RPMI8226细胞凋亡,并上调DDR相关蛋白γH2AX和pATM的表达.采用ATM激酶抑制剂KU-55933预处理靶细胞,可下调西达本胺诱导的γH2AX和pATM蛋白表达升高,从而抑制DNA损伤反应,并逆转西达本胺诱导的细胞凋亡.结论:西达本胺诱导骨髓瘤细胞增殖抑制、细胞周期停滞和细胞凋亡涉及DNA损伤反应.
关键词： 西达本胺 RPMI 8226细胞 ATM激酶 细胞凋亡 DNA损伤反应 -
人肺腺癌A549细胞低剂量辐射超敏感性及其机制的研究
目的 观察A549细胞的低剂量辐射超敏感性现象,探讨其发生的机制.方法 A549细胞接受0～2 Gy的60Co γ射线照射后,流式细胞仪对其分选计数,克隆形成法检测细胞存活分数,Western blot法检测ATMl981Ser-P蛋白表达,Hoechst 33258荧光染色法、AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,PI单染流式细胞仪检测细胞周期.结果 细胞在0～0.3 Gy表现出单位剂量杀伤增强,在0.3～0.5 Gy表现出一定的辐射抗性,0.5 Gy后的区域存活分数随辐射剂量的增加而降低.照射后1 h,ATM激酶在0.2 Gy时开始活化,0.5 Gy时活化达高峰(t=7.96,P＜0.05);与0.5 Gy相比1.0和2.0 Gy的活化水平无明显变化(t=0.69、0.55,P＞0.05).照射后24 h,部分细胞发生凋亡,其凋亡曲线与存活曲线相吻合.与未照射组相比,0.1和0.2 Gy组在各时间点(照射后6、12和24 h)的细胞周期无明显变化,而0.3、0.4和0.5 Gy组,照射后6和12 h细胞发生G2/M期阻滞(t=2.87、2.88、4.92和3.70、3.12、8.11,P＜0.05),照射后24 h G2/M期细胞比例下降(t=3.87、4.77、3.01,P＜0.05).结论 A549细胞存在HRS/IRR现象,其发生可能与ATM激酶、细胞周期变化有关,凋亡是细胞死亡的主要方式.
