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骨髓间充质干细胞分化的成骨细胞支持脐血造血干祖细胞的研究
本研究利用骨髓间充质干细胞诱导分化的成骨细胞构建二维培养体系,探讨其体外支持脐血干/祖细胞生存的作用.体外进行人骨髓间充质干细胞(MSC)原代培养后诱导为成骨细胞,构建二维培养体系.将免疫磁珠分选的CD34+脐血干/祖细胞接种于其中,在无外源性细胞因子情况下进行体外培养,进行CFU,HPP-CFU和LTC-IC测定并将其分别与MSC、成骨细胞,MSC/成骨细胞(1:2)作为饲养细胞的二维培养体系实验结果相比较.结果发现:在所构建的造血干/祖细胞(HSPC)二维培养体系中,骨髓MSC诱导成骨细胞对于脐血造血干/祖细胞培养的支持作用显著优于其他各组培养体系,尤其对长期造血干细胞(long term-HSC)体外生存有更为明显地支持作用.结论:骨髓间充质干细胞诱导成骨细胞构建的二维体系对于脐血干/祖细胞体外培养具有支持作用,进一步证实成骨细胞对造血干细胞生存与增殖具有重要调控作用.
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两亲性肽自组装凝胶与神经干细胞相容性研究
目的 将鼠神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)接种于肽自组装凝胶内部,观察凝胶与NSCs的相容性.方法 机械分离法从乳鼠大脑皮层获取细胞,免疫组织化学鉴定:1 wt%两亲性肽溶液在DMEM/F12触发下自组装为三维多孔凝胶,逶射电镜观察凝胶超微结构;1×105 cells/ml的NSCs悬液分别接种于凝胶内部f三维培养体系)及多聚赖氨酸包被的盖玻片表面(二维培养体系),Calcein-AM和PI荧光标记,激光共聚焦显微镜观察NSCs的成活及增殖情况,CCK-8绘制细胞生长曲线.结果 分离的细胞为Nestin阳性的NSCs,可分化为NSE阳性神经元及GFAP阳性胶质细胞;透射电镜显示凝胶由纳米纤维构成,纤维直径有3-5 nm,长度100-1 500 nm;Calcein-AM/PI荧光双标显示:三维培养体系中.1 h后NSCs有部分死亡;培养24 h时,开始增殖;培养48 h时,细胞增殖活跃,聚集成团.较二维培养明显.CCK-8酶标法显示:三维培养体系细胞增殖活力高于二维培养,且有显著性差异(p<0.05).结论 肽自组装三维凝胶与NSCs具有良好的细胞相容性,可促进NSCs增值.
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新型两亲性肽自组装凝胶与神经干细胞相容性研究
体外培养出神经干细胞(NSCs),接种于两亲性含IKVAV序列肽基三维凝胶内部,观察凝胶与NSCs的细胞相容性.从乳鼠大脑皮层机械分离获取NSCs,免疫组织化学方法鉴定;1 wt%两亲性肽溶液在DMEM/F12触发下自组装为三维多孔凝胶,透射电镜(TEM)观察凝胶超微结构;1×105/ml NSCs悬液接种于三维凝胶内部(三维培养体系)及多聚赖氨酸包被的盖波片表面(二维培养体系),无血清培养,DAPI/Brdu免疫荧光双标,荧光显微镜观察NSCs的成活及增殖情况.分离培养的细胞为Nestin 阳性的NSCs,可分化为NSE阳性的神经元样细胞及GFAP阳性的神经胶质样细胞;TEM显示凝胶由纳米纤维构成,纤维直径有3～5 nm,长度100～1 500 nm;二维培养体系中,Brdu标记细胞较为稀少,多呈单个分布,而在三维培养体系中标记的细胞大多聚集为球;三维培养Brdu标记细胞阳性率明显高于二维培养(P＜0.001).肽自组装三维凝胶与NSCs细胞相容性好,可促进NSCs增殖.
