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提高腺病毒载体转染造血细胞效率的研究进展
重组腺病毒作为基因转移的载体已经广泛应用于基因治疗的基础研究和临床试验,但造血细胞由于缺乏腺病毒特异性受体柯萨奇-腺病毒受体(coxsacke virus and adenovirus receptor,CAR)导致转染效率较低,从而限制了腺病毒栽体在造血系统的应用.多种策略可以提高腺病毒转染造血细胞的效率,这些策略包括腺病毒本身的改造、造血细胞CAR表达水平的提高等.本文就这一领域的主要研究进展作一综述.
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小鼠雌激素受体α基因重组腺病毒载体的构建及鉴定
目的:构建C57BL/6小鼠雌激素受体α(Esr1)重组腺病毒表达载体,扩增并纯化重组腺病毒颗粒.方法:采用RT-PCR方法从C57BL/6小鼠卵巢细胞扩增目的Esr1 CDS区基因片段,至pMD19-T Simple载体后测序鉴定.亚克隆Esr1CDS区基因片段至腺病毒穿梭质粒pDNR-CMV,再与骨架质粒pLP-Adeno-X-CMV在感受态大肠杆菌ElectroMAX~(TM) DH10B~(TM) Cells中进行同源重组获得腺病毒载体质粒Adeno-Esr1,Pacl酶切线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,测定感染性滴度,获得重组腺病毒Ad-Esr1.将病毒感染HEK293细胞,Western Blot检测Esr1蛋白表达.结果:测序证实提取的Esr1 CDS区基因序列完全正确;测序及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;感染性滴度为6.4×10~(13)(pfu/L),Western Blot检测Ad-Esr1感染的HEK293细胞能表达Esr1蛋白,而未感染的HEK293细胞蛋白不表达.结论:成功构建了C57BL/6小鼠Esr1基因重组腺病毒载体,为进一步研究Esr1在神经系统中生物学功能及对神经系统疾病的基因治疗奠定了基础.
