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HLA-A*0201-PR1复合物文献资料
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可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的构建与鉴定
为制备HLA-A*0201-PR1四聚体,本课题构建了可溶性的HLA-A*0201-PR1复合物.以原核表达的HLA-A*0201-BSP融合蛋白为重链,β2-微球蛋白(β2 m)为轻链,与人工合成的HLA-A2限制性抗原肽PR1(蛋白酶3的第169-177氨基酸,VLQELNVTV)进行共折叠复性,以生成可溶性HLA-A*0201-PR1复合物.应用BirA酶对复性混和物进行生物素化,再经阴离子交换柱纯化,得到生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物.应用凝胶过滤高效液相色谱分析可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的生成率.利用HLA-A2构象特异性抗体(BB7.2)及链霉亲和素进行Western blot和ELISA分析,对生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物进行鉴定.结果表明:在折叠体系中,主要含有HLA-A*0201-BSP聚合体、HLA-A*0201-PR1复合物及β2 m,其中可溶性复合物生成率约18%.获得的HLA-A*0201-PR1复合物可在BirA酶作用下被有效生物素化.结论:成功地获得了生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物,为进一步制备HLA-A*0201-PR1四聚体创立了基础.
