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HLA-A*0201-BSP融合基因文献资料
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HLA-A*0201-BSP融合基因的构建与原核表达
克隆表达可生物素化的HLA-A*0201的重链胞外区是制备HLA-A*0201-肽四聚体的先决条件.本研究构建重组HLA-A*0201-BSP融合基因的表达载体,以制备HLA-A2四聚体.根据已报道的序列设计特异引物,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从已鉴定为HLA-A*0201基因型的健康人白细胞中克隆HLA-A*0201重链胞外区的基因,拼接上依赖生物素-蛋白连接酶(biotin-protein ligase,BirA)的可生物素化序列(BirA substrate peptide,BSP),构建HLA-A *0201-BSP的原核表达载体,在大肠杆菌DH5α中进行表达.结果表明:成功扩增出HLA-A*0201-BSP融合基因并测序证实,构建的pBV220-HLA-A*0201-BSP可在大肠杆菌DH5α中高效表达HLA-A*0201-BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的28%,以包涵体的形式表达,经洗涤、变性后,以Sepharcyyl S-300 HR(S-300)柱层析纯化,纯度可达90%以上.结论:获得了高效表达HLA-A*0201-BSP的大肠杆菌工程菌株,建立了简便有效的包涵体纯化方法,为制备HLA-A*0201-肽四聚体奠定了基础.
