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BMP-2表达上调剂的筛选及其抗骨质疏松活性研究
目的筛选上调骨形态发生蛋白2（BMP-2）表达的新型小分子活性化合物，为研发抗骨质疏松药物提供先导化合物。
方法应用国家新药（微生物）筛选实验室前期建立的BMP-2表达上调剂的高通量筛选模型，对化合物库中10000余个化合物进行筛选，以染料木素作为阳性对照；应用实时定量 PCR 和 Western blot 方法检测活性化合物对 U-2OS 细胞 BMP-2 mRNA 和蛋白表达水平的影响。在mRNA 水平考察了活性化合物对 Runx2表达的影响， Western blot 法检测活性化合物对 Smad1/5/8蛋白磷酸化水平的影响；用 PNPP 法检测碱性磷酸酶活性，验证活性化合物体外促进成骨细胞分化的作用。
结果在 BMP-2表达上调剂模型细胞上筛选得到活性化合物 E19773，其在模型细胞上的 EC50为46.2μmol/L；实时定量 PCR 结果显示，化合物 E19773能够提高 U-2OS细胞 BMP-2和 Runx2的 mRNA 表达水平；Western blot结果显示，Smad1/5/8蛋白磷酸化水平明显升高；碱性磷酸酶结果表明 E19773能够在体外促进成骨细胞的分化。
结论化合物 E19773在0.75~50μmol/L 浓度范围内能明显上调 BMP-2的表达，主要通过 Smads 通路来调控细胞成骨分化，是活性较好的 BMP-2上调剂。关键词： 骨质疏松 高通量筛选 骨形态发生蛋白质 2 -
血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白2在非创伤性股骨头坏死不同区域的表达
目的：探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2， BMP －2）在非创伤性股骨头坏死不同区域的表达情况。方法：将从单侧人工髋关节置换术中取得的40个非创伤性坏死股骨头沿冠状面自正中用摆锯剖开，分别在坏死区、交界区和正常区各凿取1块约1 cm ×1 cm ×0．4 cm 的骨块，制成石蜡切片，采用免疫组织化学法测定不同区域 VEGF 和 BMP －2的表达情况。结果：①VEGF 表达结果。3个区域 VEGF 阳性面积百分比比较，差异有统计学意义[（6．25±2．61）％，（19．30±4．56）％，（11．63±4．12）％；χ2＝81．100，P ＝0．000]；坏死区阳性面积百分比小于交界区和正常区（χ2＝81．040，P ＝0．000；χ2＝22．200，P ＝0．000），交界区大于正常区（χ2＝18．410，P ＝0．000）。3个区域 VEGF 表达平均灰度比较，差异有统计学意义（86．30±6．84，31．85±4．89，73．93±5．78；F ＝939．984，P ＝0．000）；坏死区平均灰度大于交界区和正常区（P ＝0．000；P ＝0．000），交界区小于正常区（P ＝0．000）。②BMP －2的表达结果。3个区域的 BMP －2阳性面积百分比比较，差异有统计学意义[（5．20±2．46）％，（17．43±4．77）％，（10．03±4．32）％；χ2＝76．450，P ＝0．000]；坏死区阳性面积百分比小于交界区和正常区（χ2＝76．320，P ＝0．000；χ2＝21．950，P ＝0．000），交界区大于正常区（χ2＝27．400，P ＝0．000）。3个区域BMP －2表达平均灰度比较，差异有统计学意义（88．65±6．61，41．25±5．00，76．80±5．33；F ＝751．985，P ＝0．000）；坏死区BMP －2表达平均灰度大于交界区和正常区（P ＝0．000；P ＝0．000），交界区小于正常区（P ＝0．000）。结论：VEGF 和 BMP －2在非创伤性股骨头坏死交界区表达强度高于坏死区和正常区，交界区可能是影响股骨头坏死预后的关键区域。
关键词： 股骨头坏死 血管内皮生长因子类 骨形态发生蛋白质 2 免疫组织化学
