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乳糖化多聚赖氨酸导向反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒的作用
目的研究乳糖化多聚赖氨酸(Gal-PLL)导向反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒(HBV)基因表达的特异性抑制作用。方法 根据聚合酶链反应(PCR)产物直接测序结果，在HBV U5样序列区合成了一段16聚硫代磷酸反义寡核苷酸，并将其与肝靶向配体Gal-PLL连接，在2.2.15细胞比较，观察了它们对HBV基因表达的影响。结果 通过测序确定了2.2.15细胞中HBV DNA属于HBV表面抗原ayw1亚型，并将此用于反义寡核苷酸的序列设计；经荧光组化分析表明，Gal-PLL对大鼠肝组织有选择性亲和力；Gal-PLL与DNA形成复合物的佳摩尔比为2∶1；在相同实验条件下，硫代磷酸反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为70%和58%，而Gal-PLL硫代磷酸反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为96%和82%，同时培养上清液和细胞中HBV DNA的含量明显下降，无关序列寡核酸无明显效果，寡核苷酸对细胞未产生毒性。结论 肝靶向配体和反义寡核酸的复合物可以通过无唾液酸糖蛋白受体靶入2.2.15细胞内，并对HBV基因表达和复制产生特异性抑制作用。
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乳糖化多聚赖氨酸拉咪呋啶在慢性乙型病毒肝炎小鼠体内的肝靶向性研究
目的 观察用乳糖化多聚赖氨酸化学修饰后的拉咪呋啶-乳糖化多聚赖氨酸拉咪呋啶在慢性乙型病毒性肝炎小鼠体内的分布情况,探讨Lac-PLL-LA的肝靶向性.方法 将LA进行偶联合成后以放射性核素99mTc对偶联物Lac-PLL-LA及LA进行标记,分别通过单光子正电子发射断层显像(SPECT)和γ-放射免疫记数观察其在慢性乙型病毒性肝炎小鼠体内的分布情况.结果 (1)慢性乙型病毒性肝炎小鼠注射99mTc标记的LA0.5h、2h及5h后肝脏部位显像模糊不清,各时间点99mTc标记的Lac-PLL-LA组小鼠肝脏部位显像剂的聚集程度均明显高于99mTc 标记的LA组,两组显像剂的聚集程度差异有显著性(P<0.01).(2)小鼠注射99mTc标记的Lac-PLL-LA后1到6h,肝脏/血液和肝脏/骨骼肌放射性比值分别从1.24、2.28上升到4.1、12.1,注射99mTc-LA后1到6h,肝脏/血液和肝脏/骨骼肌放射性比值分别从0.28、0.55上升到0.49、1.36.各时间点99mTc标记的Lac-PLL-LA肝脏/血液和肝脏/骨骼肌放射性比值均高于99mTc-LA,差别有非常显著性(P<0.01).结论 Lac-PLL-LA可在慢性乙型肝炎小鼠肝组织中特异性聚集,偶联后的拉咪呋啶能提高对肝脏组织的亲和力,乳糖化多聚赖氨酸能使LA获得较满意的肝靶向性,提高其抗乙肝病毒的作用.
