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蛋白质p24文献资料
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HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定
目的在原核表达系统中对HIV p24抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性.方法利用PCR技术从HIV-1全基因质粒(B2N)中扩增p24抗原基因,并克隆入T载体中.通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导,表达p24抗原.利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白.并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、Western Blot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测.结果PCR产物约为690 bp,与预期p24抗原全基因片段大小一致.重组质粒T-p24和pRSET-p24经BamH I和HindⅢ双酶切,其插入的外源基因片段均为690 bp.将纯化前与纯化后的蛋白作SDS-PAGE电泳,均可见一条约24×103的外源基因表达带,与计算的相对分子质量相符.经WB和ELISA试验,证明基因工程表达的p24抗原具有较高的特异性及活性.结论成功构建了HIV p24表达载体pRSET-p24,并在原核细胞中高效表达,其表达产物具有良好的特异性及活性.
