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汉坦病毒包膜糖蛋白G2的基因克隆与序列分析
目的 建立汉坦病毒(HV)包膜糖蛋白G2的克隆载体;进行系统发生树分析,研究G2基因的变异情况.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增山东省HV G2基因片段,克隆于PMD-18T载体,经氨卞西林筛选,酶切鉴定后,进行序列测定,应用DNASTAR软件将其与世界范围内的病毒株基因序列进行分析.结果 扩增得到山东省高密、淄川、莒南、荣成四地G2基因.序列同源性分析表明,四地G2基因都属于SEO型HV,与Z37株核苷酸同源性高,与其他SEO型各株的同源性为82.3%～99.8%;绘出了G2基因及氨基酸的系统发生树.结论 成功地建立了山东省四地HV G2基因克隆载体;四地HV G2基因同源性高,为山东省SEO型HV的遗传与变异、分子流行病学研究,以及制备有效的亚单位疫苗提供了依据.
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河北省人感染汉坦病毒G2片段基因分型及序列特征分析
目的 了解河北省人感染汉坦病毒的基因型和基因亚型.方法 根据76～118株和R22株的C2编码区设计型特异性引物,利用RT-nested PCR技术对采集的HFRS患者中汉坦病毒抗体阳性的血清标本进行检测及基因分型,从中选取部分标本的扩增产物纯化回收后进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件包进行基因分析.结果 69份阳性血清标本经RT-nested PCR检测17份阳性,检出率为24.64%,其中≤7 d的标本检出率为34.29%,8～14 d的检出率为19.23%,≥14 d的未能检出.17份阳性标本均为SEO型.对其中9份扩增产物的G2区测序后表明,9份血清标本的同源性为92.0%～100.0%,其中HeB7与其他8份标本的同源性为92.0%～95.0%,属不同亚型,与R22的同源性为97.7%,同属于S1亚型;除HeB7外其余8份标本同源性高达95.7%～100%,同属于S3亚型.9份标本与76～118株的同源性仅为70.3%～72.7%.结论 河北省人感染汉坦病毒以SEO型为主,亚型以S3为主,也存在S1亚型.在一定范围内,同型汉坦病毒基因相对保守,具有区域稳定性特征.
