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IL-28A在家蚕BmN细胞及蛹中的表达
IL-28A是2003年Sheppard等报道的白细胞介素,它属于干扰素λ(IFN-λ)类.IL-28主要功能有抗病毒、抗细胞增殖及免疫调节等作用.Bac-to-Bac家蚕杆状病毒表达载体系统不仅表达水平高而且对人安全,蚕蛹可药、可食,利用家蚕杆状病毒表达系统表达外源蛋白为基因工程口服药物的研发提供了可能.
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利用杆状病毒表达载体系统表达重组乙型肝炎病毒核心蛋白
目的 利用杆状病毒表达载体系统制备重组乙型肝炎病毒核心蛋白.方法 构建含有HBV C基因的杆状病毒转移载体pFastBac Dual-HBV core,转化大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞Sf9,获得含有HBV C基因的重组杆状病毒.用重组杆状病毒感染Sf9细胞进行乙型肝炎病毒核心蛋白表达,然后通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达情况.结果 成功构建了含HBV C基因的重组杆状病毒,而且在昆虫细胞Sf9中表达了乙型肝炎病毒核心蛋白.结论 利用Bac to Bac杆状病毒表达系统,成功地表达了乙型肝炎病毒核心蛋白,为进一步研究奠定了基础.
关键词: 乙型肝炎病毒核心蛋白 杆状病毒表达载体系统 昆虫细胞 -
牛IL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其活性
目的:在杆状病毒表达载体中表达牛白细胞介素-18(bovine interleukine-18, BoIL-18)成熟蛋白基因, 并鉴定其生物学活性.方法:设计一对特异性引物, 将编码BoIL-18的成熟蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTb上, 构建重组质粒repFastBac HTb-18, 转化至DH10Bac感受态细胞中得到重组Bacmid(Bacmid-BoIL18).在Cellfectin作用下, 将Bacmid-BoIL18转染昆虫细胞sf9获得重组杆状病毒, 然后将重组杆状病毒感染sf9, 感染后不同时间收获sf9细胞, 进行SDS-PAGE电泳, 分析表达情况; 用BoIL-18的原核表达产物作为抗原制备的兔多克隆抗体进行Western blot分析; 将纯化的表达产物对牛外周血单个核细胞(PBMC)进行细胞增殖试验, 对健康牛脾进行IFN-γ诱生试验, 初步分析表达产物的生物学活性.结果:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达, 经薄层凝胶扫描分析证实, 表达量占总蛋白的21.3%; Western blot分析证明, 在相对分子质量(Mr)约为26000处有一条特异性条带.生物学活性分析表明, 纯化的表达产物可明显增强淋巴细胞增殖, 促进IFN-γ的产生.结论:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达, 表达产物具有良好的生物学活性.
关键词: BoIL-18成熟蛋白基因 杆状病毒表达载体系统 昆虫细胞 生物学活性 -
昆虫杆状病毒表达载体系统与疫苗研制的30年回顾
1983年12月,一篇关于用昆虫杆状病毒感染昆虫细胞表达重组人β干扰素文章的发表,标示了杆状病毒表达载体系统( Baculovirus expression vector system,BEVS)的诞生。迄今为止,已采用BEVS表达生产了数千种重组蛋白,其中7种已被成功用于商品化人用或兽用疫苗的抗原。仅对30年来基于BEVS的疫苗研制作一论述。
关键词: 杆状病毒 昆虫细胞 杆状病毒表达载体系统 疫苗