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激动型CD40单链抗体增强小鼠NK细胞抗肿瘤作用
目的 获得高纯度的激动型抗小鼠CD40单链抗体(scFv),并体内外验证激动型抗小鼠CD40 scFv增强自然杀伤细胞(NK)杀伤肿瘤的作用.方法 亲和层析技术获得高纯度的激动型抗小鼠CD40 scFv蛋白.激动型抗小鼠CD40 scFv体外激活DC细胞,ELISA法检测培养上清中IL-12表达水平,反应CD40 scFv对DC的激活能力.将激活的DC细胞与小鼠NK细胞共培养后,将NK细胞与小鼠成纤维瘤T6-17细胞共培养,用WST-8法检测激活后NK细胞对T6-17的杀伤作用.进一步构建BALB/c 裸鼠的T6-17肿瘤模型,给予CD40 scFv瘤体注射,观察对肿瘤生长抑制作用.种瘤后第20天处死小鼠,ELISA检测肿瘤组织匀浆中IL-12和IFN-γ水平.流式细胞术检测肿瘤组织匀浆中浸润NK细胞数量的变化,免疫组化法检测NKG2D表达水平的变化.结果 成功构建CD40 scFv-pET28a重组质粒,并经基因测序验证无误.SDS-PAGE和His-tag Western blot检测证实CD40 scFv表达成功,蛋白质相对分子质量约为27×103.CD40 scFv处理的DC细胞的培养上清中IL-12水平为(555.86±40.48) pg/ml,较对照组明显升高(P<0.05).利用各组激活后的DC细胞培养上清刺激NK细胞后,与CD40 scFv处理的DC共培养的NK细胞对T6-17细胞的杀伤能力为(72.23±3.99)%,较对照组明显升高 (P<0.05).CD40 scFv在体内对BALB/c 裸鼠的T6-17肿瘤生长有明显抑制作用,肿瘤终生长体积相较于对照组显著降低(P<0.05).CD40 scFv组肿瘤组织匀浆中IL-12和IFN-γ水平分别为(188.801±32.718) pg/ml和(121.428±30.994) pg/ml,均较生理盐水(normal saline,NS)组显著升高(P<0.05).CD40 scFv组肿瘤组织NKG2D表达阳性率为(8.18±2.01)%,较NS组明显升高(P<0.05).结论 激动型CD40 scFv可以通过DC细胞增强NK细胞的抗肿瘤能力.
关键词： 激动型CD40单链抗体 树突状细胞 自然杀伤细胞 T6-17细胞
