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小鼠NKT细胞在5型腺病毒感染所致肝损伤早期的免疫调节作用
目的 使用5型腺病毒(AdS)感染小鼠模型来研究肝脏NKT细胞(natural killer Tcell)在肝损伤早期的免疫调节机制.方法 C57BL/6小鼠尾静脉注射1.5×109PFU和3×109PFUAdS病毒以构建两个剂量组病毒感染的小鼠肝损伤模型,通过观察病毒感染后5 d内小鼠肝组织病理学及小鼠血清丙氨酸转氨酶/天门冬氨酸转氨酶(ALT/AST)水平改变来判断肝损伤程度,使用流式细胞术(FACS)分析感染5 d内肝单个核细胞亚群比例、NKT细胞表面FasL表达水平以及NKT细胞合成IL-4和IFN-γ水平的变化,应用RT-PCR检测小鼠肝内趋化因子及趋化因子受体表达水平.结果 高滴度(3×109 PFU)的AdS病毒感染小鼠1 d后,小鼠肝脏内NKT细胞明显增加,其表面FasL表达上调,肝脏NKT细胞合成IL-4和IFN-γ的水平明显增加,肝组织内淋巴细胞浸润明显;低滴度AdS病毒(1.5×109PFU)感染小鼠后,肝脏NKT细胞比例变化不明显,CD8+T细胞在肝脏的浸润明显弱于高滴度AdS病毒感染;RT-PCR检测结果 显示:3×109PFU AdS病毒感染2 d后,小鼠肝内活化后可调节的及正常的T细胞分泌的趋化因子(RANTES)、人干扰素诱导蛋白10(IP-10)以及巨噬细胞炎症蛋白(MIP)-1β表达增加,3d后相关趋化因子受体CCR5、CCR1、CXCR3表达上调.结论 NKT细胞在淋巴细胞向肝脏趋化的过程中起重要的作用,这种作用与病毒感染诱导NKT细胞合成IL-4和IFN-γ及上调其表面的FasL,从而促进肝细胞内IP-10、Mig等趋化因子的产生有关.
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腺病毒介导microRNA-99a过表达抑制肝癌细胞生长
目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a( miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法.方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表达,构建含miR-99a的重组5型腺病毒Ad5-miR-99a.用空载腺病毒Ad-blank和Ad5-miR-99a分别感染Huh7细胞,MTT法和集落形成实验检测miR-99a过表达对Huh7细胞生长的抑制作用.结果:与正常肝细胞L02和其他肝癌细胞相比,miR-99a在肝癌Huh7细胞中表达量相对低(P＜0.01).成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,Ad5-miR-99a感染Huh7细胞后,miR-99a可在Huh7细胞中稳定高表达.集落形成实验和MTT实验显示,相对于Ad-blank组,Ad5 -miR-99a可显著抑制Huh7细胞的生长和集落形成(P＜0.01).结论:成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,miR-99a能有效抑制肝癌细胞的增殖,Ad5-miR-99a有可能成为治疗肝癌的新药物.
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重新燃起的希望:艾滋病疫苗的研究现状
艾滋病疫苗的研发一直是各国科研人员重视的课题.然而,艾滋病疫苗的研发之路充满了坎坷,目前在研的该类疫苗多达40多种,却没有一种可以完全预防艾滋病,由美国制药巨头默克公司开发、曾被誉为艾滋病疫苗中的"希望之星"的V520(又称MRKAd5 HIV-1 gag/pol/nef)疫苗,也因一项名为STEP的临床研究显示其既不能帮助未携带病毒者有效预防病毒感染也不能减少病毒携带者的病毒载量而于2007年被迫宣告失败,这一项历时10年、耗资巨大的项目的功亏一篑,使全球从事艾滋病疫苗研发的人员积极性严重受挫,艾滋病疫苗的研究也由此跌入了低谷.
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人5型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
目的：制备抗人5型腺病毒（HAdV5）六邻体（Hexon）蛋白的单克隆抗体并对其进行鉴定。方法用纯化的Hexon蛋白免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经ELISA间接法筛选和克隆化培养，获得4株分泌抗 HAdV5的Hexon蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。纯化获得单克隆抗体，使用ELISA 和Western blot鉴定单克隆抗体的敏感性和特异性。结果 ELISA和Western blot结果表明这4株单克隆抗体与 HAdV5的Hexon蛋白可以特异性结合。单克隆抗体株4A9-HRP标记和8D6建立的ELISA夹心法具备较高灵敏度和特异性。结论获得4株抗 HAdV5的 Hexon蛋白的单克隆抗体，为 HAdV5相关的疫苗研制和 HAdV5感染性疾病的早期快速诊断奠定了基础。
